內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在矽肺患者肺泡巨噬細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、目的：初步探討矽肺患者肺泡巨噬細(xì)胞（AM）中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)分子的表達(dá)規(guī)律。通過(guò)阻斷ATF6、IRE-1、PERK三條通路，比較阻斷前后GRP78、ATF6、IRE-1、PERK、CHOP、Caspase-4、Caspase-3 mRNA及GRP78、Caspase-3蛋白相對(duì)表達(dá)水平變化，探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在矽肺患者肺泡巨噬細(xì)胞凋亡中的作用。
　　方法：選取在中國(guó)煤礦工人北戴河療養(yǎng)院進(jìn)行大容量肺灌洗的矽肺壹期、貳期、叁期男性患者23、

2、25、24例分別設(shè)為矽肺壹期、貳期、叁期組，以8例診斷為觀察對(duì)象的男性矽塵作業(yè)工人為對(duì)照組，所有研究對(duì)象均排除患有肺炎、活動(dòng)性肺結(jié)核、肺心病等肺部疾病、傳染性疾病以及其他部位纖維化性疾病的病人。收集研究對(duì)象的全肺灌洗回收液，分離、純化AM，將純化后的AM分為4組：未處理組、ATF6抑制劑組、IRE-1抑制劑組和PERK抑制劑組，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞24h，提取RNA和蛋白，采用實(shí)時(shí)定量熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real Time PCR，RT-PCR

3、）檢測(cè)AM中葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）、C/EBP同源蛋白（CHOP）、ATF6、IRE-1、PERK、天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-4和Caspase-3 mRNA相對(duì)表達(dá)水平。采用免疫印跡法（Western Blot）方法檢測(cè)AM中GRP78蛋白和Caspase-3蛋白表相對(duì)表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1、矽肺患者內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)分子 mRNA及蛋白表達(dá)規(guī)律。本研究發(fā)現(xiàn)矽肺患者AM的GRP78和Caspase-

4、3 mRNA及蛋白表達(dá)水平均高于對(duì)照組（P＜0.05）,矽肺叁期組GRP78 mRNA及蛋白表達(dá)水平低于矽肺貳期組。Caspase-3 mRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)水平隨著矽肺期別的增加呈上升趨勢(shì)，矽肺貳期組和叁期組高于矽肺壹期組（P＜0.05）。CHOP和Caspase-4 mRNA表達(dá)水平高于對(duì)照組，且隨著矽肺期別的增加呈上升趨勢(shì)，矽肺貳期、叁期組高于矽肺壹期組（P＜0.05）。ATF6、IRE-1和PERK mRNA與GRP78 mRN

5、A變化趨勢(shì)一致，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。2、吸煙和粉塵暴露因素對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)分子mRNA及蛋白表達(dá)的影響。200支～組和400支～組矽肺患者AM中GRP78 mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)水平高于0支組，400支～組低于200支～組（P＜0.05）。200支～組和400支～組矽肺患者AM中Caspase-3 mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)水平高于0支組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。200支～組和400～支組矽肺患者AM中CHOP和C

6、aspase-4 mRNA表達(dá)水平高于0組（P＜0.05）。Caspase-3蛋白在未脫塵組的相對(duì)表達(dá)水平高于脫塵組（P＜0.05）。Caspase-3和CHOP mRNA表達(dá)水平在接塵工齡≥15年組高于＜15年組（P＜0.05）。CHOP、Caspase-4和Caspase-3 mRNA在未脫塵組的相對(duì)表達(dá)水平高于脫塵組（P＜0.05）。3、經(jīng)多因素研究發(fā)現(xiàn)，矽肺期別是影響GRP78和CHOP mRNA表達(dá)的因素，矽肺期別、吸煙指數(shù)和

7、GRP78 mRNA是Caspase-4 mRNA表達(dá)的影響因素，矽肺期別、吸煙指數(shù)是Caspase-3 mRNA和蛋白表達(dá)的影響因素。4、不同處理因素對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)分子表達(dá)水平的影響經(jīng)3種抑制劑處理后，GRP78和Caspase-3 mRNA及蛋白表達(dá)水平均低于未處理組（P＜0.05）。CHOP和Caspase-4mRNA表達(dá)水平均低于未處理組，GRP78 mRNA在觀察對(duì)象、矽肺貳期組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。CHOP、C