λ310轉(zhuǎn)基因青鳉檢測化合物的致突變效應(yīng)方法的建立及其應(yīng)用研究.pdf

1、隨著人類活動的進(jìn)一步加大，社會的逐漸進(jìn)步，環(huán)境中的化合物逐漸增多，越來越嚴(yán)重的威脅到人類的健康。尤其是近年來的一系列檢測表明人類的生存環(huán)境在進(jìn)一步惡化，人類的健康處在危險中，但是相關(guān)的檢測化合物突變效應(yīng)的結(jié)果很少，簡便的檢測方法也不多，大部分人還沒有意識到危險。隨著人類研究的不斷深入，越來越多的證據(jù)表明，環(huán)境中存在的污染物可以導(dǎo)致人類基因的突變，并最終導(dǎo)致各種癌癥的發(fā)生。
　　 本文以轉(zhuǎn)基因青鳉魚為實驗材料，在實驗室建立的條件下

2、，利用CⅡ檢測方法來衡量化合物的突變效應(yīng)，并通過優(yōu)化部分實驗方法，使實驗結(jié)果穩(wěn)定。我們檢測轉(zhuǎn)基因青鳉小魚和成魚肝臟組織的自發(fā)突變率分別為1.9士0.36(×10-5)和3.5士0.62(×10-5)。用ENU處理轉(zhuǎn)基因的青鳉1h來檢驗CⅡ檢測方法，結(jié)果表明，和其他文獻(xiàn)報道的結(jié)果一致，說明該實驗方法在實驗室成功建立。
　　 全氟辛烷磺酸(Perfluorooctanesulphonicacid，PFOS)具有難降解性和沿食物鏈在生

3、物體內(nèi)富集作用，已經(jīng)成為一種新型的持久性有機(jī)環(huán)境污染物，嚴(yán)重危害人類健康與自然環(huán)境，己增列入《斯德哥爾摩公約》。國內(nèi)外對PFOS的毒理學(xué)研究已經(jīng)開展起來，PFOS在魚體內(nèi)中易吸收確難消除，其具有脂質(zhì)過氧化、內(nèi)分泌紊亂、肝臟毒性、心血管毒性、免疫毒性、生殖發(fā)育和潛在的神經(jīng)毒性，但是對于PFOS是否具有是否能夠引起基因突變還沒有明確的結(jié)論。
　　 為研究PFOS是否能夠引起基因突變效應(yīng)，以濃度為0、9.8、257.0μg/LPFOS

4、靜止連續(xù)暴毒轉(zhuǎn)基因青鳉30天，30天后用CⅡ檢測方法來檢測其致突變效應(yīng)。結(jié)果表明，對照組的突變頻率為4.25士0.34(×10-5)，9.8μg/L和257.0μg/L,組的突變頻率分別為6.05士0.46(×10-5)，6.25士0.33(×10-5)，p=0.0092＜0.01)，相比于對照組，處理組突變率分別增加了1.42和1.47倍，差別有統(tǒng)計學(xué)意義。通過分析突變體的序列發(fā)現(xiàn)對照組的突變類型最多的是顛換53％，主要是G:C-+T

5、:A和G:C-+C:G，其次是轉(zhuǎn)換32％，以G:C→A:T為主(73％)，移碼突變只有15％，插入和缺失幾乎相同；9.8μg/LPFOS處理組的突變類型中轉(zhuǎn)換和顛換的比例幾乎差不多，其中A:T-+G:C轉(zhuǎn)換明顯高于對照組，G:C-+C:G顛換明顯低于對照組，其它突變類型差別不大，和對照組相比沒有統(tǒng)計學(xué)意義的差別；257μg/LPFOS處理組的顛換比例下降為41％，轉(zhuǎn)換和對照組差不多，移碼突變的比例上升至23％，其中有78％是+1插入突變