抗菌化合物高通量篩選方法的建立與初步應(yīng)用.pdf

1、抗生素等抗菌化合物的發(fā)現(xiàn)是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重大成就之一，它們可以通過多種機(jī)制殺死病原微生物或抑制其生長，拯救無數(shù)人和動(dòng)物的生命。然而隨著病原微生物對(duì)抗菌藥物抵抗力的不斷發(fā)展，很多耐藥菌引起的感染面臨無藥可用的困境。耐藥性的不斷增加已成為嚴(yán)重的全球公共衛(wèi)生難題，威脅著生命安全和經(jīng)濟(jì)發(fā)展。因此，急需新的策略來推動(dòng)新的抗菌藥物的研發(fā)，來應(yīng)對(duì)耐藥性的挑戰(zhàn)。鑒于上述背景，本論文就抗菌化合物的高通量篩選的方法開展了研究，并進(jìn)行了初步應(yīng)用。
　　1.

2、抗菌化合物高通量篩選方法的建立
　　選取具有6種抗性的胸膜肺炎放線桿菌菌株APPHB0503作為篩選菌株，以APPHB0503敏感的四環(huán)素為陽性參照物，采用OD值法和化學(xué)發(fā)光法兩種方式來測(cè)量抑菌活性。根據(jù)高通量篩選方法的判定標(biāo)準(zhǔn)（Zhangetal.，1999），分別計(jì)算了OD值法的Z值為0.952±0.018，信號(hào)值與背景值的比值(S/B)為0.061±0.004;化學(xué)發(fā)光法的Z值為0.824±0.067，S/B為0.005±0

3、.001;信號(hào)的變異系數(shù)均＜10％，建立了可靠的基于細(xì)菌水平的高通量篩選方法，其中化學(xué)發(fā)光法比OD值法靈敏性高。
　　2.LOPAC化合物庫的高通量篩選
　　利用本研究建立的高通量篩選的方法，篩選了SigmaLOPAC化合物庫中的1280個(gè)化合物，篩選出了32種對(duì)HB0503有較好抑制活性的化合物，其中有13種是已知的抗菌藥物。從剩余的19種化合物中選取了效果較好的8個(gè)化合物:A111、E85、G76、L65、M63、M85

4、、M96和N91，測(cè)定了它們的對(duì)APPHB0503的最小抑菌濃度(MIC90)分別為19.93μM、0.0013μM、4.59μM、36.52μM、24.67μM、8.95μM、4.69μM和8.76μM。
　　3.化合物抗菌譜的檢測(cè)
　　對(duì)篩選出來的8個(gè)化合物進(jìn)行了抗菌譜的測(cè)定，測(cè)定它們對(duì)APP4074、HPS0165、E.coliATCC25922、SS2SC-19、S.aureusATCC29213抑菌活性。其中化合物

5、E85、M96和N91表現(xiàn)出很好的抗菌活性，MIC90均＜26.5μM;L65和M63的抑菌活性比較差，MIC90均＞36.5μM;A111、G76和M85對(duì)不同細(xì)菌的抑制活性表現(xiàn)出很大差異。
　　4.化合物細(xì)胞毒性的測(cè)定
　　檢測(cè)了8個(gè)化合物對(duì)BHK-21細(xì)胞生長情況的影響，并計(jì)算了半數(shù)抑制濃度(CC50)。其中A111、L65、M63和M85對(duì)BHK-21的生長幾乎沒有影響，CC50值均＞105μM;E85、G76、M9