PHLPP、FOXO3a和RAD51在卵巢漿液性癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：卵巢上皮性腫瘤是卵巢腫瘤中最常見(jiàn)的組織學(xué)類型，占原發(fā)性卵巢腫瘤50％~70%，占卵巢惡性腫瘤的85%~90%，是女性生殖器官腫瘤中病死率最高的惡性腫瘤。卵巢上皮性腫瘤的病理學(xué)類型包括卵巢漿液性癌、粘液性癌、子宮內(nèi)膜樣癌、透明細(xì)胞癌、移行細(xì)胞癌，其中卵巢漿液性癌最常見(jiàn)，約占卵巢上皮性癌的40-60%。近年來(lái)通過(guò)對(duì)形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)等的研究提示卵巢漿液性癌能夠很好的應(yīng)用二元發(fā)病理論：卵巢低級(jí)別漿液性腺癌是由良性→交界性→惡性演變過(guò)程而

2、逐步發(fā)展，卵巢高級(jí)別漿液性腺癌直接來(lái)源于卵巢表面上皮，也有研究提示來(lái)源于輸卵管上皮組織。
　　卵巢漿液性腺癌是一種基因疾病，其發(fā)生、發(fā)展的過(guò)程基礎(chǔ)是基因的異常，涉及到抑癌基因的失活與癌基因的激活，總體的來(lái)說(shuō)是一種多因素的、多步驟的生物學(xué)行為。PHLPP是一種抑癌基因，在許多種腫瘤組織中低表達(dá)，如：卵巢癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、惡性膠質(zhì)瘤等。研究發(fā)現(xiàn)， PHLPP通過(guò)使PI3K-AKT信號(hào)通路中的AKT的疏水基團(tuán)去磷酸化，使其通路抑制，

3、從而實(shí)現(xiàn)對(duì)AKT下游的因子的負(fù)調(diào)控。Foxo3a作為PI3K-Akt信號(hào)通路中的AKT下游重要的信號(hào)分子，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。FoxO3a是FOXO家族中的重要一員，通過(guò)調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，參與細(xì)胞增殖、分化、發(fā)展及血管生成等。FoxO3a廣泛的存在于人體的各個(gè)組織，如：結(jié)腸、乳腺、胃、卵巢等組織中。在PI3K-AKT信號(hào)通路中被AKT磷酸化后的FoxO3a可通過(guò)對(duì)下游基因的調(diào)控而促使腫瘤的發(fā)生發(fā)展。RAD51就是 FoxO3

4、a重要的下游分子之一，RAD51基因是 DNA雙鏈斷裂修復(fù)基因，其表達(dá)的RAD51蛋白是進(jìn)行同源重組修復(fù)的關(guān)鍵酶。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，在許多腫瘤組織（乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌等）RAD51的表達(dá)升高，從而導(dǎo)致同源重組的能力增高，使基因的不穩(wěn)定性增加，從而導(dǎo)致細(xì)胞重組修復(fù)失控、凋亡、基因突變等，和腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。本研究應(yīng)用免疫組化三步法的研究方法及卵巢二元論模型的理論基礎(chǔ)，檢測(cè)在正常卵巢組織、漿液性囊腺瘤（良性）、交界性漿液性腫

5、瘤、卵巢低級(jí)別漿液性癌PHLPP、FoxO3a、RAD51的表達(dá)，以及在輸卵管組織、卵巢高級(jí)別漿液性癌兩組里三者的表達(dá)規(guī)律，從而進(jìn)一步探討卵巢漿液性腺癌高、低兩種不同級(jí)別的發(fā)病機(jī)制，從而對(duì)卵巢漿液性癌的預(yù)后和治療方面提供相關(guān)的參考依據(jù)。
　　方法：收集2006年1月至2011年1月河北醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院的婦產(chǎn)科初次進(jìn)行手術(shù)治療的北方漢族女性，術(shù)前未進(jìn)行任何的化學(xué)及放射治療、均是第一次手術(shù)治療、術(shù)后病理組織證實(shí)的、具有完整的臨床資

6、料的臨床病例，共145例，其中卵巢高、低級(jí)別漿液性腺癌分別為46例和26例、卵巢漿液性交界性囊腺瘤21例，卵巢漿液性囊腺瘤35例。根據(jù)二元理論，高級(jí)別漿液性腺癌起源于卵巢組織，低級(jí)別漿液性腺癌起源于輸卵管上皮，故選取正常卵巢組織9例及正常輸卵管組織8例為對(duì)照。運(yùn)用免疫組織化學(xué)三步法的實(shí)驗(yàn)方法來(lái)檢測(cè)正常卵巢組織、卵巢漿液性囊腺瘤、卵巢交界性漿液性囊腺瘤、卵巢低級(jí)別漿液性腺癌中，以及輸卵管組織與卵巢高級(jí)別漿液性腺癌中，PHLPP、FoxO3

7、a、RAD51的表達(dá)情況，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)格按照免疫組化三步法試劑盒的操作說(shuō)明書進(jìn)行，用磷酸鹽緩沖液(PBS）代替一抗作為陰性對(duì)照，而陽(yáng)性對(duì)照選擇的是已知的陽(yáng)性病理切片。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS21.0軟件，采用卡方檢驗(yàn)來(lái)處理計(jì)數(shù)資料，Kaplan-Meier單因素分析，繪制相應(yīng)的生存曲線，計(jì)算出生存率；Cox多因素分析各因素對(duì)卵巢漿液性腺癌預(yù)后的影響；Log-rank檢驗(yàn)法比較患者的生存率之間是否有差別。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

8、　　結(jié)果：
　　1.PHLPP在卵巢漿液性腺癌（不同級(jí)別）中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的影響
　　在卵巢漿液性腺癌高級(jí)別組、輸卵管組、低級(jí)別組、交界性組、囊腺瘤組、正常卵巢組，PHLPP陽(yáng)性的表達(dá)例數(shù)為11/46、6/8、6/26、16/21、32/35、9/9，表達(dá)率為23.9%、75.0%、23.1%、76.2%、91.4%、100%。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，高級(jí)別組PHLPP陽(yáng)性的表達(dá)率明顯低于輸卵管組，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

9、低級(jí)別組與交界性組、囊腺瘤組和正常卵巢組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），其余各組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。高級(jí)別組和低級(jí)別組之間的表達(dá)率也無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　在46例高級(jí)別組中，PHLPP蛋白表達(dá)陰性的3年和5年生存率為32.0%和8.0%；PHLPP蛋白表達(dá)陽(yáng)性的3年和5年生存率為37.5%和12.5%；統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明PHLPP蛋白陽(yáng)、陰性表達(dá)的3年生存率之間無(wú)顯著差異（P＞0.05），其5年生存率也不存在顯著差異（P＞0.

10、05）。在26例低級(jí)別組，PHLPP蛋白表達(dá)陰性的3年和5年生存率為58.3%和16.7%；PHLPP蛋白表達(dá)陽(yáng)性的3年和5年生存率為80.0%和60.0%；統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明：低級(jí)別中PHLPP蛋白陽(yáng)、陰性表達(dá)者的3年生存率和5年生存率不存在顯著差異（P＞0.05）。
　　2.FoxO3a在卵巢漿液性腺癌（不同級(jí)別）中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的影響
　　在卵巢漿液性腺癌高級(jí)別組、輸卵管組、低級(jí)別組、交界性組、囊腺瘤組、正常卵巢組，F(xiàn)ox

11、O3a陽(yáng)性的表達(dá)例數(shù)為12/46、6/8、7/26、13/21、29/35、9/9，表達(dá)率為26.1%、75%、26.9%、61.9%、82.9%、100%。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，F(xiàn)oxO3a蛋白在卵巢漿液性腺癌高級(jí)別組的表達(dá)顯著低于正常輸卵管組（P＜0.05）。在低級(jí)別組的表達(dá)率顯著低于交界性組、囊腺瘤組和正常卵巢組，在交界性組的表達(dá)率也顯著低于正常卵巢組（P＜0.05）。高級(jí)別組和低級(jí)別組之間的表達(dá)率也無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　

12、　FoxO3a在46例高級(jí)別組，表達(dá)陽(yáng)性的3年和5年生存率為57.1%和28.6%；FoxO3a表達(dá)陰性的3年和5年生存率為26.9%和3.8%；統(tǒng)計(jì)分析示，高級(jí)別組中FoxO3a陽(yáng)、陰性的表達(dá)者3年的生存率無(wú)差異（P＞0.05），F(xiàn)oxO3a表達(dá)陽(yáng)性5年的生存率顯著的高于陰性組（P＜0.05）。在26例低級(jí)別組，F(xiàn)oxO3a陽(yáng)性表達(dá)的3年和5年生存率為83.3%和66.7%；FoxO3a陰性表達(dá)的3年和5年生存率為55.6%和0%；統(tǒng)

13、計(jì)學(xué)分析表明，在低級(jí)別組中FoxO3a蛋白陽(yáng)、陰性表達(dá)者的3年生存率不存在顯著差異（P＞0.05），F(xiàn)oxO3a表達(dá)陽(yáng)性5年的生存率顯著的高于陰性組（P＜0.05）。
　　3.RAD51在卵巢漿液性腺癌（不同級(jí)別）中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的影響
　　在卵巢漿液性腺癌高級(jí)別組、輸卵管組、低級(jí)別組、交界性組、囊腺瘤組、正常卵巢組，RAD51陽(yáng)性的表達(dá)例數(shù)為33/46、1/8、17/26、10/21、9/35、2/9，表達(dá)率為71.7%、

14、12.5%、65.4%、47.6%、25.7%、22.2%。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，RAD51蛋白在高級(jí)別組的表達(dá)顯著高于正常輸卵管組，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義（P＜0.05）。低級(jí)別組陽(yáng)性的表達(dá)率顯著低于正常卵巢組和囊腺瘤組（P＜0.05）。高級(jí)別組和低級(jí)別組之間的表達(dá)率無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　RAD51在46例高級(jí)別組，表達(dá)陽(yáng)性3年和5年的生存率為25.0%和4.2%；RAD51陰性的3年和5年的生存率是55.6%、22.2%；統(tǒng)

15、計(jì)分析示， RAD51陽(yáng)性的3年生存率和5年生存率均顯著的低于陰性組（P＜0.05）。在26例低級(jí)別組，RAD51陽(yáng)性的3年和5年的生存率為55.7%和11.1%；RAD51陰性的患者的3年和5年的生存率是85.7%、57.1%；統(tǒng)計(jì)分析， RAD51陽(yáng)性與陰性的3年生存率之間無(wú)顯著差異（P＞0.05），其5年生存率陰性組明顯高于陽(yáng)性組（P＜0.05）。
　　4.卵巢漿液性腺癌不同級(jí)別的COX多因素生存分析
　　將PHLPP

16、、FoxO3a、RAD51、年齡、轉(zhuǎn)移、臨床分期、化療、多種因素納入卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌的Cox多因素生存分析，發(fā)現(xiàn)：在卵巢漿液性腺癌高級(jí)別組中，術(shù)后化療進(jìn)入Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型，說(shuō)明術(shù)后化療是影響高級(jí)別組的獨(dú)立預(yù)后因子。在卵巢漿液性腺癌低級(jí)別組中，沒(méi)有因素能夠進(jìn)入Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型。
　　結(jié)論：
　　1.卵巢漿液性腺癌高級(jí)別組PHLPP、FoxO3a蛋白的表達(dá)降低，而RAD51蛋白的表達(dá)升高，提示三種基因可能參與了

17、卵巢高級(jí)別漿液性腺癌的發(fā)生。
　　2.卵巢漿液性腺癌（低級(jí)別）、漿液性囊腺瘤（交界性）、漿液性囊腺瘤（良性組）、正常卵巢組織中PHLPP、FoxO3a蛋白的表達(dá)逐漸升高，而RAD51蛋白的表達(dá)逐漸降低，三者可能參與卵巢漿液性腺癌（低級(jí)別）發(fā)病的過(guò)程。
　　3.PHLPP、FoxO3a、RAD51三種蛋白在卵巢漿液性腺癌低、高級(jí)別組中的表達(dá)無(wú)顯著差異，說(shuō)明卵巢不同級(jí)別的漿液性腺癌的發(fā)生可能存在許多共同分子基礎(chǔ)。
　　4.