Calcyclin在卵巢上皮性癌中的表達及其臨床意義.pdf

1、目的：
　　卵巢上皮性癌是常見的女性惡性腫瘤之一,在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中,其死亡率也是最高的。卵巢癌患者的早期癥狀不典型,目前尚無有效的早期篩查和特異性診斷方法,超過70％的患者已是中晚期。目前標準治療方案為理想的腫瘤減滅術(shù)和以鉑類為基礎的化療,但近年來卵巢癌患者五年生存率僅為30%-40%左右[42]。尋找卵巢癌有效的基因治療的分子靶點是卵巢癌目前亟待解決的臨床問題。
　　鈣周期蛋白(Calcyclin,Cacy)屬于S

2、100蛋白家族。文獻報道,Calcyclin在胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、結(jié)直腸癌等多種類型的惡性腫瘤中均出現(xiàn)表達明顯增加[3,27-32]。有研究證實Calcyclin與上皮性癌發(fā)生發(fā)展相關[36,37]。還有研究表明Calcyclin高表達與胰腺癌、骨肉瘤、胃癌、肺腺癌、黑色素瘤等多種惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和不良預后相關[28,38-40]。這些研究均提示,Calcyclin可能是腫瘤基因治療的良好候選靶點。
　　目前Calc

3、yclin蛋白在卵巢上皮性癌中的表達及其臨床意義尚不清楚。本研究旨在從組織水平、血清水平統(tǒng)計分析Calcyclin蛋白表達與卵巢癌的相關性,并初步探討Calcyclin作為腫瘤基因治療的可行性。
　　方法：
　　(1)本研究首先用免疫組化技術(shù)檢測60例卵巢癌病理組織標本中Calcyclin的蛋白表達情況,統(tǒng)計分析Calcyclin與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展的關系,探討Calcyclin與卵巢上皮性癌臨床病理因素之間的相關性;

4、　　(2)用ELISA法檢測正常血清、良性卵巢腫瘤和卵巢癌患者 Calcyclin血清濃度,統(tǒng)計分析Calcyclin血清濃度與卵巢癌的相關性,初步驗證Calcyclin作為檢測卵巢癌病情發(fā)展的分子標志物的可行性;
　　(3)我們利用RNA干擾技術(shù)特異性降低Calcyclin表達水平后,觀察卵巢癌細胞細胞周期、侵襲能力、順鉑敏感性等生物學行為的變化,探討Calcyclin作為卵巢癌靶向治療候選基因的可行性。
　　結(jié)果：

5、>　　(1)免疫組化檢測卵巢癌組織中Calcyclin表達情況,結(jié)果表明低分化的卵巢癌患者中Calcyclin高表達比例(55.0%)顯著高于高分化的卵巢癌患者中Calcyclin高表達比例(15.4%),有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。Calcyclin表達水平與手術(shù)分期有關,隨著手術(shù)分期的增加,Calcyclin表達水平也隨之明顯上升,有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。在出現(xiàn)腹水和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者中,Calcyclin高表達的比例明

6、顯增加,有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。
　　(2)ELISA法檢測Calcyclin血清濃度,結(jié)果表明卵巢癌患者Calcyclin血清平均濃度為1242.47+178.17 pg/ml,顯著高于正常血清(489.73+37.86 pg/ml)和良性卵巢腫瘤(700.75+43.14 pg/ml),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。然后我們統(tǒng)計分析了不同手術(shù)分期和細胞學分級的卵巢癌患者Calcyclin血清濃度。結(jié)果顯示Ⅲ期、Ⅳ期

7、卵巢癌患者Calcyclin血清濃度分別為644.79+67.89 pg/ml和1087.44+104.66 pg/ml,顯著高于Ⅰ期、Ⅱ期卵巢癌患者(359.35+37.82 pg/ml和499.44+42.56 pg/ml),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。同時我們還發(fā)現(xiàn)低分化的卵巢癌患者Calcyclin血清濃度顯著升高,為1320.08+102.59 pg/ml,與高分化(573.58+37.28 pg/ml)和中分化(83

8、2.91+75.62 pg/ml)相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　(3)利用RNA干擾技術(shù)特異性降低Calcyclin表達水平后,細胞周期檢測結(jié)果表明,Calcyclin表達降低后A2780細胞出現(xiàn)了G0/G1期比例升高,S期比例降低。轉(zhuǎn)染6.25、12.5nmol/L Calcyclin siRNA后A2780細胞增殖指數(shù)分別為39.4和31.0,較空白對照組和陰性對照siRNA組顯著降低。
　　(4)Tra

9、nswell試驗結(jié)果表明,Calcyclin siRNA分別轉(zhuǎn)染A2780細胞后穿膜細胞數(shù)目顯著減少,有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。這一結(jié)果提示隨著Calcyclin表達降低,A2780細胞侵襲能力也隨之明顯降低。
　　(5)MTT法檢測Calcyclin siRNA轉(zhuǎn)染后A2780細胞對順鉑敏感性的影響,結(jié)果顯示Calcyclin siRNA引起順鉑對A2780細胞的抑制率增加,即一定程度提高了A2780細胞對順鉑的敏感性。對順

10、鉑半數(shù)致死劑量(IC50)的計算結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染6.25、12.5nmol/L Calcyclin siRNA的A2780細胞對順鉑IC50值分別為13.42μM和11.32μM,和陰性對照siRNA組IC50值(18.12μM)均顯著降低。
　　結(jié)論：
　　(1)免疫組化結(jié)果顯示Calcyclin表達水平與卵巢癌細胞分化程度、手術(shù)分期、腹水和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關,提示Calcyclin表達和與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移和不良預后密

11、切相關,有可能成為臨床評價病情進展和隨訪的參考指標。
　　(2)Calcyclin的血清濃度在卵巢癌患者中顯著升高,并與手術(shù)分期和細胞學分級相關,提示Calcyclin的血清濃度與卵巢癌病情發(fā)展相關。但本研究由于時間有限,病例樣本量較小,Calcyclin能否成為監(jiān)測腫瘤病情發(fā)展的分子標志物還需要進一步大樣本研究驗證。
　　(3)Calcyclin siRNA轉(zhuǎn)染卵巢癌A2780細胞后,引起A2780細胞G0/G1期阻滯,侵