沙參麥冬湯對(duì)大鼠放射性肺炎的防治作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：放射性肺炎的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，目前對(duì)其病因和發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)尚不十分清楚，西醫(yī)臨床上常規(guī)使用腎上腺皮質(zhì)激素進(jìn)行治療，但副作用大，所以放射性肺炎的防治是一個(gè)亟待解決的難題。大量的臨床研究表明，中醫(yī)藥防治放射性肺炎療效確切，能有效改善患者的臨床癥狀，提高生活質(zhì)量，降低死亡率，因此探討中醫(yī)藥防治放射性肺炎具有十分重要的實(shí)際意義。沙參麥冬湯是臨床上防治放射性肺炎的有效方，且是中醫(yī)傳統(tǒng)古方之一，目前尚未發(fā)現(xiàn)沙參麥冬湯防治放射性肺炎的作用

2、機(jī)理研究的報(bào)道。本課題首先復(fù)制放射性肺炎的大鼠模型，以促炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子和促纖維化細(xì)胞因子為切入點(diǎn)，從放射性肺炎的基礎(chǔ)證候(肺陰虛)入手，以沙參麥冬湯作為養(yǎng)陰清肺的基本方，觀察該方對(duì)大鼠肺系數(shù)、肺組織病理形態(tài)的影響；對(duì)大鼠肺組織SOD活性、MDA含量的影響；對(duì)大鼠肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)及其組織抑制劑(TIMP-2)蛋白質(zhì)表達(dá)和MMP-2mRNA基因表達(dá)的影響；尤其是對(duì)大鼠血漿促炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子TNF-α、IL-6及促纖維化細(xì)

3、胞因子TGF-β1的影響進(jìn)行研究，以評(píng)價(jià)沙參麥冬湯對(duì)放射性肺炎的防治效果，并探求其可能的作用機(jī)制，為臨床使用提供確切的科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：將141只清潔級(jí)雄性SD大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、沙參麥冬湯預(yù)防組(中預(yù)組)、沙參麥冬湯治療組(中治組)、地塞米松治療組(西治組)，其中正常對(duì)照組21只，其它各組均為30只。除正常對(duì)照組外，其余各組均給予X射線全胸單次照射20Gy。除中預(yù)組于照射前1周起開始灌服沙參麥冬湯外，其余各

4、組于造模后第二天起，正常對(duì)照組、模型組予等容積的生理鹽水灌胃，中治組灌服沙參麥冬湯，西治組予地塞米松混懸液灌胃，每日1次。每組分別于2、4、6周隨機(jī)處死大鼠，正常對(duì)照組7只，其余各組10只，10％水合氯醛溶液腹腔注射麻醉。大鼠心臟采血約5ml，置肝素抗凝管中，4℃3000r/min離心10min，分離血漿，置-20℃冰箱保存待查。采用ELISA法檢測(cè)大鼠血漿IL-6、TNF-α、TGF-β1含量的變化。采集大鼠肺組織，稱重，計(jì)算肺系數(shù)的

5、變化；HE染色光鏡下觀察大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)變化。免疫組化法觀察大鼠肺組織MMP-2、TIMP-2蛋白表達(dá)的變化?；瘜W(xué)比色法檢測(cè)肺組織SOD活性、MDA含量的變化。用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法測(cè)定肺組織MMP-2mRNA的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：
　　 (1)除25Gy組大鼠在照射后2周內(nèi)相繼死亡外，10Gy、15Gy、20Gy組大鼠全部存活，且在照射后2周天至4周已呈現(xiàn)急性炎癥反應(yīng)，以20Gy最為典型，結(jié)合

6、大鼠的一般情況觀察，說明20Gy照射劑量能在較短時(shí)間內(nèi)成功制作大鼠放射性肺炎模型，為今后研究中醫(yī)藥防治放射性肺炎的作用機(jī)制及防治藥物的篩選提供了基礎(chǔ)。
　　 (2)沙參麥冬湯可明顯降低放射性肺炎大鼠肺系數(shù)(P<0.01)，中預(yù)組作用優(yōu)于中治組，中預(yù)組、中治組，西治組各組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。肺組織病理學(xué)形態(tài)觀察表明，中預(yù)組、中治組與模型組比較，炎性細(xì)胞侵潤、肺泡充血、滲出、出血等方面程度較輕。西治組第2周肺泡隔

7、充血，出血相對(duì)模型組無明顯差別，但炎性細(xì)胞浸潤相對(duì)較輕，4、6周差別不明顯。第2、4、6周相對(duì)中治組、中預(yù)組，炎性程度較重。西治組第4周有小膿腫出現(xiàn)，第6周小膿腫增多，考慮是地塞米松造成機(jī)體免疫力下降，并發(fā)感染所致。正常對(duì)照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰，支氣管、肺泡及肺泡間隔組織結(jié)構(gòu)正常，肺泡膈中無中性粒細(xì)胞浸潤，無充血、水腫及急慢性炎癥等改變。各時(shí)間點(diǎn)均未出現(xiàn)明顯病理改變。
　　 (3)與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠肺組織中SOD活性均

8、下降(P<0.01)，MDA含量升高(P<0.05)；與模型組比較，中預(yù)組、中治組、西治組大鼠肺組織中SOD活性均有升高(P<0.01)，MDA含量降低(P<0.01)。SOD活性：中預(yù)組高于中治組、西治組(P<0.01)。中治組高于西治組(P<0.05)。MDA含量：中預(yù)組低于中治組、西治組(P<0.01)，中治組低于西治組(P<0.05)。
　　 (4)與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血漿中IL-6、TNF-α、TGF-β1含量

9、值2、4、6周均有顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，中預(yù)組、中治組、西治組大鼠血漿中IL-6、TNF-α、TGF-β1顯著降低(P<0.01或P<0.05)。中預(yù)組低于中治組、西治組(P<0.01)，中治組低于西治組(P<0.01)。
　　 (5)與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠2至4周肺組織MMP-2、TIMP-2蛋白表達(dá)均增強(qiáng)(P<0.01)，但MMP-2/TIMP-2比值逐漸增大。4周以后，模型組大鼠肺組織MMP-2蛋白

10、逐漸降低而TIMP-2表達(dá)逐漸增強(qiáng)，MMP-2/TIMP-2比值逐漸變小。與模型組比較，中預(yù)組、中治組MMP-2、TIMP-2蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.01或P<0.05)，MMP-2/TIMP-2處于相對(duì)平衡狀態(tài)。中預(yù)組在2、4周優(yōu)于中治組，在第6周差異不顯著。中治組優(yōu)于西治組(P<0.01)。西治組各時(shí)間點(diǎn)MMP-2、TIMP-2變化與模型組相比，無明顯差異(P>0.05)。中預(yù)組大鼠肺組織MMP-2蛋白表達(dá)2、4周低于中治組(2周

11、P<0.05，4周P<0.01)，6周不明顯(P>0.05)。中預(yù)組大鼠肺組織TIMP-2蛋白表達(dá)2周與中治組比較差異不明顯(P>0.05)，4、6周中預(yù)組低于中治組(4周P<0.05，6周P<0.01)。中預(yù)組大鼠肺組織MMP-2蛋白表達(dá)低于西治組(2、4周P<0.01，6周P<0.05)，中預(yù)組大鼠肺組織TIMP-2蛋白表達(dá)與西治組比較2周差異不明顯(P>0.05)，4、6周中預(yù)組低于西治組(P<0.01)。中治組大鼠肺組織MMP-

12、2蛋白表達(dá)2周低于西治組(P<0.05)，4、6周不明顯(P>0.05)。中治組大鼠肺組織TIMP-2蛋白表達(dá)與西治組比較2、4周差異不明顯(P>0.05)，6周中治組低于西治組(P<0.05)。
　　 (6)與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠肺組織MMP-2mRNA表達(dá)量均增多(P<0.01)；與模型組比較，治療各組大鼠肺組織MMP-2mRNA表達(dá)量顯著減少(P<0.01)。中預(yù)組與中治組無顯著差異(P>0.05)；中治組優(yōu)于西治組

13、(2、6周P<0.01，4周P<0.05)。
　　 結(jié)論：沙參麥冬湯對(duì)放射性肺炎有一定的防治效果。其防治作用可能通過以下途徑實(shí)現(xiàn)：增強(qiáng)大鼠肺組織SOD的活性，減少M(fèi)DA含量；抑制血漿促炎癥因子IL-6、TNF-α子和促纖維化細(xì)胞因子TGF-β1的釋放；降低放射性肺炎大鼠肺組織MMP-2、TIMP-2蛋白質(zhì)表達(dá)，調(diào)節(jié)MMP-2/TIMP-2的平衡；降低放射性肺炎大鼠肺組織MMP-2 mRNA的表達(dá)。從多途徑有效保護(hù)肺組織，不同程度