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1、目的:探討大鼠離體心室肌細(xì)胞舒張期鈣滲漏與鈣調(diào)蛋白依賴性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、蛋白激酶A(PKA)之間的關(guān)系。
方法:1.采用“四步”酶消化法分離SD大鼠心室肌細(xì)胞,即無鈣臺(tái)氏液灌流、60μ mol/L低鈣酶液灌流、180μ mol/L低鈣臺(tái)氏液灌流和室溫下KB液中孵育。2.實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、異丙腎上腺素(isoprenaline,ISO)組、CGP組、H-89組、KN-93組共5組。ISO灌流Fura-2/AM熒光標(biāo)記好的
2、心室肌細(xì)胞,模擬慢性心力衰竭時(shí)的β-腎上腺素受體過度激活狀態(tài)。3.利用鈣成像技術(shù)先后測(cè)定不同組藥物干預(yù)后心室肌細(xì)胞內(nèi)鈣熒光強(qiáng)度比值Ratio值(R1),加入丁卡因阻斷肌漿網(wǎng)鈣釋放通道的R2值,以及加入咖啡因后觸發(fā)肌漿網(wǎng)中儲(chǔ)存鈣釋放的R3值。(R1-R2)代表心肌細(xì)胞舒張期鈣滲漏,(R3-R1)即代表肌漿網(wǎng)鈣容量,兩者的比值反映了鈣滲漏程度。
結(jié)果:1.五組間加咖啡因后胞漿內(nèi)鈣熒光強(qiáng)度上升幅度即肌漿網(wǎng)鈣容量差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3、2.與對(duì)照組相比,ISO組心肌細(xì)胞加丁卡因后胞漿內(nèi)鈣熒光強(qiáng)度下降幅度(△Fratio:0.014±0.0025 vs.0.004±0.0011,P<0.01)、鈣滲漏程度(%:44.3±5.32 vs.20.3±7.33,P<0.05)明顯增加;CGP組與ISO組相比,心肌細(xì)胞加丁卡因后胞漿內(nèi)鈣熒光強(qiáng)度下降幅度(△Fratio:0.007±0.0019 vs.0.014±0.0025,P<0.01)、鈣滲漏程度(%:23.6±7.49
4、vs.44.3±5.32,P<0.05)明顯減少;CGP組與對(duì)照組相比,上述指標(biāo)差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.H-89組和對(duì)照組相比,加丁卡因后胞漿內(nèi)鈣熒光強(qiáng)度下降幅度(△Fratio:0.014±0.0031 vs.0.004±0.0011,P<0.01)、鈣滲漏程度(%:47.9±6.78vs.20.3±7.33,P<0.05)明顯增加;H-89組與ISO組相比,上述指標(biāo)差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.KN-93組與ISO組相比,心肌細(xì)胞加丁卡因后胞
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