產(chǎn)前應(yīng)激對子代大鼠海馬鈣依賴性激酶系統(tǒng)作用的研究.pdf

1、研究目的： 發(fā)育生物學(xué)的研究表明，胚胎期是腦發(fā)育的關(guān)鍵時期。在胚胎期母體所遭受的任何來自外界的不良刺激，均可直接或間接的影響胎兒腦發(fā)育。我們課題組前期研究工作已經(jīng)證實(shí)：產(chǎn)前束縛應(yīng)激，可以使子代大鼠海馬神經(jīng)元發(fā)生氧化性損傷、海馬CA1和CA2區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)增加、海馬內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量發(fā)生變化、各種相關(guān)受體表達(dá)變化、子代大鼠學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降。在此工作基礎(chǔ)上，我們選擇產(chǎn)前束縛應(yīng)激大鼠的子代為研究對象，探討產(chǎn)前束縛應(yīng)激對子代海馬神經(jīng)元細(xì)

2、胞的鈣調(diào)蛋白及其依賴的蛋白激酶系統(tǒng)的影響，進(jìn)一步揭示產(chǎn)前應(yīng)激對子代學(xué)習(xí)記憶功能影響的分子機(jī)制，為研究鈣信號系統(tǒng)在應(yīng)激性腦損傷的治療中的潛在作用提供思路，也為孕婦圍產(chǎn)期保健及促進(jìn)兒童早期腦發(fā)育提供科學(xué)的理論依據(jù)。 研究方法： 我們建立了大鼠產(chǎn)前束縛應(yīng)激模型：24只孕鼠隨機(jī)分為對照組(n=8)、中期產(chǎn)前應(yīng)激組(n=8)和晚期產(chǎn)前應(yīng)激組(n=8)。中期應(yīng)激組母鼠在妊娠期的第7-14天，每天接受3次束縛應(yīng)激，每次45分鐘；晚期應(yīng)

3、激組母鼠在妊娠期的第14-20天，每天接受3次束縛應(yīng)激，每次45分鐘；對照組母鼠不作任何處理。仔鼠生后第30天，從每窩中隨機(jī)抽取雌雄各1只用于實(shí)驗(yàn)。應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡法分別檢測子代大鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)鈣調(diào)蛋白(CaM)、鈣調(diào)蛋白依賴的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、磷酸化的鈣調(diào)蛋白依賴的蛋白激酶Ⅱ(p— CaMKⅡ)各自的表達(dá)量。 研究結(jié)果： 1．產(chǎn)前應(yīng)激對子代大鼠海馬神經(jīng)元鈣調(diào)蛋白表達(dá)的影響： 應(yīng)激組子代大鼠海馬神經(jīng)元的

4、CaM的表達(dá)量顯著下降，中期應(yīng)激組與晚期應(yīng)激組跟對照組相比，均有明顯下降；中期應(yīng)激組與晚期應(yīng)激組之間，未見顯著區(qū)別。 1)雌性子代：應(yīng)激組雌性子代大鼠中期應(yīng)激組與晚期應(yīng)激組子代大鼠海馬神經(jīng)元的CaM的表達(dá)，跟對照組相比，均有顯著下降(1.89±0.17vs1.34±0.12，P＜0.05；1.89±0.17vs0.89±0.31，P＜0.01)，中晚期應(yīng)激組雌性子代之間，CaM的表達(dá)也有差異(1.34±0.12 vs0.89±0

5、.31；P＜0.05)； 2)雄性子代：應(yīng)激組雄性子代大鼠中期應(yīng)激組與晚期應(yīng)激組子代大鼠海馬神經(jīng)元的CaM的表達(dá)，跟對照組相比，均有顯著下降(1.64±0.17vs0.99±0.12，P＜0.05；1.64±0.17vs0.89±0.14，P＜0.05)，中晚期應(yīng)激組雄性子代之間，CaM的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.99±0.12vs0.89±0.14，P＞0.05)； 3)雌、雄子代比較：應(yīng)激組雌、雄性子代大鼠中期應(yīng)激組與晚

6、期應(yīng)激組子代大鼠海馬神經(jīng)元的CaM的表達(dá)，跟對照組相比，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 2．產(chǎn)前應(yīng)激對子代大鼠海馬神經(jīng)元鈣調(diào)蛋白依賴的蛋白激酶Ⅱ表達(dá)的影響 產(chǎn)前應(yīng)激對子代大鼠海馬神經(jīng)元鈣調(diào)蛋白依賴的蛋白激酶Ⅱ表達(dá)的影響依性別不同而略有差異。 1)雌性子代：應(yīng)激組雌性子代大鼠中期應(yīng)激組與晚期應(yīng)激組子代大鼠海馬神經(jīng)元的CaMKⅡ的表達(dá)，跟對照組相比，均有顯著升高(1.53+0.3vs2.48+0.32，P＜0.05

7、；1.53±0.3vs2.94±0.3，P＜0.05)，中晚期應(yīng)激組雌性子代之間，CaMKⅡ的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(2.48±0.32vs2.94±0.3，P＞0.05)： 2)雄性子代：應(yīng)激組雄性子代大鼠中期應(yīng)激組與晚期應(yīng)激組子代大鼠海馬神經(jīng)元的CaMKⅡ的表達(dá)，跟對照組相比，均有明顯降低(3.32±0.33vs2.2±0.27P＜0.05，3.32±0.33vs2.14±0.31P＜0.05)，中晚期應(yīng)激組雄性子代之間，CaMK

8、Ⅱ的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(2.2±0.27 vs2.14+0.31，P＞0.05)； 3)雌、雄子代比較：對照組雌雄子代之間，海馬神經(jīng)元鈣調(diào)蛋白依賴的蛋白激酶Ⅱ的表達(dá)，差異顯著(P＜0.01)，中晚期應(yīng)激組雌雄子代之間，未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05) 3．產(chǎn)前應(yīng)激對子代大鼠海馬神經(jīng)元磷酸化的鈣調(diào)蛋白依賴的蛋白激酶Ⅱ表達(dá)的影響 產(chǎn)前應(yīng)激對子代大鼠海馬神經(jīng)元磷酸化的鈣調(diào)蛋白依賴的蛋白激酶Ⅱ表達(dá)的影響依性別不同而略有差異。

9、 1)雌性子代：晚期應(yīng)激組雌性子代大鼠海馬神經(jīng)元磷酸化的鈣調(diào)蛋白依賴的蛋白激酶Ⅱ的表達(dá)，比對照組顯著降低(3.63±0.88vs1.25±0.35，P＜0.05)，而中期應(yīng)激組未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(3.63±0.88vs2.45±0.36，P＞0.05)； 2)雄性子代：晚期應(yīng)激組雄性子代大鼠海馬神經(jīng)元磷酸化的鈣調(diào)蛋白依賴的蛋白激酶Ⅱ的表達(dá)，比對照組顯著增高(1.73±0.43vs3.15±0.71，P＜0.05)，而中期應(yīng)激

10、組未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(1.73±0.43vs2.0±0.47，P＞0.05)； 3)雌、雄子代比較：對照組與中期應(yīng)激組雄性子代大鼠海馬神經(jīng)元磷酸化的鈣調(diào)蛋白依賴的蛋白激酶Ⅱ的表達(dá)，未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，晚期應(yīng)激組則顯著升高(P＜0.05)。 4．產(chǎn)前應(yīng)激對子代大鼠海馬Glu和GABA含量的影響： 應(yīng)激組動物腦組織內(nèi)谷氨酸濃度，比對照組明顯升高(0.1324±0.00366μ mol/mg vs0.0766±