腦血管內(nèi)皮超極化因子對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用及機制.pdf

1、目的：研究乙酰膽堿(ACh)介導的大鼠腦血管釋放的內(nèi)皮超極化因子(EDHF)對大鼠腦組織缺血-再灌注損傷和神經(jīng)細胞缺氧-再給氧損傷是否具有保護作用及其可能的機制。 方法： 1.在體實驗：利用大鼠大腦中動脈栓塞 （MCAO)損傷模型，以1 μmol·L-1 ACh從大鼠頸總動脈(CCA)注入大腦血管中，結(jié)合PGI2和NO合成阻斷劑 (L-NAME)和 (Indo)的應(yīng)用，刺激腦血管釋放EDHF，并以高濃度KCI(25 mm

2、ol·L-1)作為EDHF的合成阻斷劑，觀察了腦血管釋放的EDHF對大鼠的腦梗死面積、腦含水量和血清中乳酸脫氫酶( LDH)、丙二醛( MDA)的影響。 2.離體實驗：應(yīng)用PCl2細胞及原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元細胞缺氧-再給氧損傷模型，結(jié)合PGl2和NO合成阻斷劑L-NAME和Indo的應(yīng)用，直接將ACh(終濃度1μmol·L-1)作用于分離的大鼠大腦中動脈(MCA)血管段，使其釋放EDHF，并以終濃度25 mmol·L-1的K

3、Cl、膜滲透性鈣離子螯合劑BAPTA-AM及鈣調(diào)素拮抗劑氯丙嗪(CPZ)作為EDHF的合成阻斷劑，觀察了大腦中動脈血管段釋放的EDHF對PCl2細胞和原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元細胞的MTT染色吸光度、細胞培養(yǎng)上清液中LDH活力的影響，另外，分別用Hoechst法和流式細胞儀(FC)法檢測了大鼠MCA血管段釋放的EDHF對原代培養(yǎng)大鼠海馬細胞凋亡的影響，用激光共聚交顯微鏡(CLSM)觀察了EDHF對原代培養(yǎng)大鼠海馬細胞中游離鈣離子濃度的影響，

4、也用Western blot法觀測了EDHF對海馬神經(jīng)元細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(erk1/2)表達的影響。 結(jié)果： 1.在體實驗結(jié)果 與假手術(shù)組相比，MCAO模型組大鼠的腦梗死面積明顯增加(假手術(shù)組大鼠的腦梗死面積為0)，腦含水量和血清中LDH和MDA含量則顯著性增多；與MCAO模型組比較，ACh組和ACh十L-NAME+Indo組的大鼠腦梗死面積顯著性減小，腦含水量及血清中LDH活力和MDA含量也明顯降低，而ACh

5、+L-NAME+Indo+KCl組的各項指標與模型組無明顯區(qū)別。實驗結(jié)果表明，ACh作用于腦血管后能產(chǎn)生抑制大鼠MCAO損傷的保護作用，此保護作用含有非NO和非PGI2的作用成分，該作用成分與腦血管內(nèi)皮釋放的EDHF關(guān)系密切 2.離體實驗結(jié)果 1) ACh作用于大鼠MCA血管段后能產(chǎn)生抑制PCl2細胞缺氧-再給氧損傷的保護作用，此保護作用既不是由單獨的ACh產(chǎn)生，也不是由單獨的MCA產(chǎn)生，且具有血管內(nèi)皮依賴性，此外，這種保

6、護作用含非NO和非PGI2的作用成分，此作用成分與大鼠MCA內(nèi)皮釋放的EDHF密切相關(guān)。 2) ACh作用于大鼠MCA血管段后能產(chǎn)生抑制原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細胞缺氧-再給氧損傷的保護作用，此保護作用既不是由單獨的ACh產(chǎn)生，也不是由單獨的MCA產(chǎn)生，具有血管內(nèi)皮依賴性，此外，這種保護作用含非NO和非PGI2的作用成分，且此作用成分與大鼠MCA血管段內(nèi)皮釋放的EDHF關(guān)系密切，這種EDHF相關(guān)的細胞保護作用成分機制與降低神經(jīng)細胞內(nèi)游