應(yīng)用酵母雙雜交和酵母三雜交系統(tǒng)研究G蛋白信號(hào)傳導(dǎo)通路中的相關(guān)蛋白因子.pdf

1、G蛋白是一類由Gα、β、γ三亞基組成的異三聚體蛋白,可介導(dǎo)胞外各種刺激（如：激素、生長因子、物化信息等）向胞內(nèi)傳導(dǎo),調(diào)節(jié)細(xì)胞生長,分裂、分化等重要生命活動(dòng).活化的Gα亞基（Gα-GTP）和Gβγ亞基二聚體可以作為相對(duì)獨(dú)立的結(jié)構(gòu)和功能單位引發(fā)不同的信號(hào)傳導(dǎo)通路.目前,研究這兩個(gè)功能單位下游的新的效應(yīng)因子及Gβ和Gγ亞基在Gβγ亞基二聚體胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)中的作用是研究的熱點(diǎn)問題.為了尋找Gβγ下游的新的蛋白因子及研究Gβ或Gγ亞基在Gβγ亞基二

2、聚體中的作用,以揭示G蛋白信號(hào)傳導(dǎo)的新機(jī)制,該研究課題運(yùn)用酵母雙雜交系統(tǒng)和該室構(gòu)建的酵母三雜交系統(tǒng),分別以Gβ1和Gβ1γ2為餌蛋白篩選入腦cDNA文庫（Gβ1,Gγ2在腦中高表達(dá)）,并用免疫共沉淀、細(xì)胞免疫熒光共聚焦等技術(shù)證實(shí)蛋白間的相互作用,另外又用片段刪除實(shí)驗(yàn)定位蛋白分子間相互識(shí)別和結(jié)合的特異結(jié)構(gòu)域.結(jié)果說明：Gβ1亞基作為獨(dú)立單位可以與Fascin蛋白結(jié)合,參與細(xì)胞骨架調(diào)控,首次揭示了G蛋白通過Gβ1亞基參與細(xì)胞骨架調(diào)控的機(jī)制;