表達人抗凝血蛋白的豬內(nèi)皮細胞與抗凝藥物對人血小板聚集的影響.pdf

1、目的：凝血功能紊亂一直是困擾異種器官利用的關鍵因素。本實驗觀察表達人抗凝血蛋白的豬動脈血管內(nèi)皮細胞（pAEC）與抗凝藥物對人外周血中血小板聚集的影響,為克服異種移植中可能出現(xiàn)的血栓性微血管?。═hrombotic microangiopathy，TMA）與消耗性凝血病（Consumptive coagulopathy，CC）提供實驗依據(jù)。
　　方法：①抗凝血藥物對血小板聚集的影響將抗凝藥物（肝素、低分子肝素、水蛭素）濃度為1 IU

2、/mL，5IU/ml加入到WT-pAEC中，通過血小板聚集檢測儀，檢測不同濃度的抗凝藥物對血小板聚集的影響。②表達人抗凝血蛋白的豬動脈血管內(nèi)皮細胞（pAEC）對人外周血血小板聚集的影響。a用流式細胞儀檢測表達人抗凝血蛋白（α-1，3-半乳糖苷基因敲除[GTKO]、人類補體蛋白調(diào)節(jié)基因[CD46，CD55]、血栓調(diào)節(jié)蛋白基因[TBM]、內(nèi)皮C蛋白受體基因[EPCR]）的豬動脈血管內(nèi)皮細胞中基因表達水平;b將轉(zhuǎn)基因豬動脈血管內(nèi)皮細胞分為GT

3、KO-pAEC，GTKO/CD46/CD55-pAEC，GTKO/CD46/TBM-pAEC，GTKO/CD46/EPCR-pAEC四組，陽性對照組為野生型（WT-pAEC）,陰性對照組為人動脈內(nèi)皮細胞（hAEC）；c通過血小板聚集檢測儀，檢測各種動脈內(nèi)皮細胞對血小板聚集的影響。③表達人抗凝血蛋白的pAEC與抗凝藥物共同作用時，對人血小板聚集的影響。將不同濃度的抗凝藥物加入到效果最好的轉(zhuǎn)基因pAEC中通過血小板聚集檢測儀，檢測其對血小板

4、聚集的影響。
　　結果：①抗凝藥物（肝素、低分子肝素、水蛭素）都能抑制人外周血血小板聚集，1IU/ml的低分子肝素、水蛭素僅能部分抑制人血小板聚集(聚集率分別為15％、29%)。5IU/ml的低分子肝素、水蛭素與1IU/ml的肝素都幾乎能完全抑制人血小板聚集（聚集率分別為3%、4%）。②表達人抗凝血蛋白的豬動脈血管內(nèi)皮細胞GTKO-pAEC，GTKO/CD46/CD55-pAEC，GTKO/CD46/TBM-pAEC，GTKO/C

5、D46/EPCR-pAEC對人外周血血小板聚集有抑制作用（聚集率分別為44%、39%、27%、33%），其中GTKO/CD46/TBM-pAEC的抑制效果最佳（27%）。③GTKO/CD46/TBM-pAEC與抗凝藥物共同作用人血小板聚集，其聚集率可降至4%。
　　結論：①抗凝藥物（肝素、低分子肝素、水蛭素）都能抑制人外周血血小板聚集。②表達人抗凝血蛋白的豬動脈血管內(nèi)皮細胞可以明顯降低人血小板聚集率。③在抗凝藥物存在的條件下，表達