NMDA受體亞單位NR1在正常生后早期大鼠SVZ區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞上的超微分布.pdf

1、目的: 研究NMDA受體亞單位NR1在生后早期正常大鼠的腦室下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞上的超微分布特點(diǎn)，為進(jìn)一步研究NR1在生后早期大鼠SVZ區(qū)神經(jīng)發(fā)生中的作用提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。
　　 方法: 正常健康SD大鼠根據(jù)生后不同時(shí)期分為P7d、P14d、P21d、P28d四組，用含多聚甲醛、戊二醛和苦味酸的磷酸緩沖液（pH 7.4）沖灌固定，取腦，用同一固定液后固定，并做100μm振動(dòng)切片，蔗糖浸泡，經(jīng)液氮凍融處理后，室溫下兔血清封閉，用nesti

2、n 標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞，1.4nm金標(biāo)記NR1，用包埋前免疫電鏡技術(shù)，經(jīng)系列脫水，置換，Epon812浸潤(rùn)，做平板包埋，聚合后在光鏡下選取切片中免疫反應(yīng)陽(yáng)性部位，取材并粘貼于空白包埋塊上，做70nm超薄切片（ReichertNissei，Leica），經(jīng)醋酸鈾、枸櫞酸鉛雙重染色，在日立H-600透射電子顯微鏡下觀察、拍照，并做圖像分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、免疫過(guò)氧化物酶標(biāo)電鏡方法顯示，P7d、P14d、P21d、P28

3、d正常大鼠SVZ區(qū)內(nèi)均有nestin免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物的黑色嗜鋨電子致密物出現(xiàn)，呈絮狀分布在SVZ區(qū)細(xì)胞的胞漿內(nèi)。
　　 2、免疫納米金標(biāo)電鏡方法顯示，P7d、P14d、P21d、P28d正常大鼠SVZ區(qū)內(nèi)均有NR1免疫標(biāo)記反應(yīng)陽(yáng)性物出現(xiàn)，呈黑色顆粒狀，分布在SVZ區(qū)細(xì)胞的胞膜上、核膜上和胞漿內(nèi)，且在胞漿內(nèi)的線粒體上偶見(jiàn)免疫金顆粒的存在。
　　 3、用免疫過(guò)氧化物酶標(biāo)和免疫納米金標(biāo)結(jié)合的免疫電鏡雙標(biāo)方法顯示，P7d、P14

4、d、P21d、P28d正常大鼠SVZ區(qū)內(nèi)均有nestin免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物和NR1免疫標(biāo)記反應(yīng)陽(yáng)性物出現(xiàn)。Nestin免疫反應(yīng)陽(yáng)性物呈絮狀分布在神經(jīng)干細(xì)胞的胞漿內(nèi)，NR1免疫反應(yīng)陽(yáng)性物呈黑色顆粒狀彌散分布在神經(jīng)干細(xì)胞和室管膜細(xì)胞的胞膜上、核膜上和胞漿內(nèi)，并在神經(jīng)干細(xì)胞的胞漿內(nèi)可見(jiàn)有免疫過(guò)氧化物酶標(biāo)記物與免疫金顆粒的共存。
　　 結(jié)論:
　　 通過(guò)nestin標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞的免疫過(guò)氧化物酶標(biāo)和1.4nm金標(biāo)記NR1的免疫納米