神經(jīng)干細胞生存因子在大鼠脊髓損傷前后的表達.pdf

1、目的：觀察大鼠脊髓損傷后干細胞來源的神經(jīng)干細胞生存因子mRNA在大鼠正常和損傷脊髓的表達變化，探討其在脊髓損傷與修復過程中可能的生物學作用。 方法：制備大鼠脊髓損傷模型，采用RT-PCR方法，分析SDNSFmRNA在大鼠脊髓中的表達及其在損傷前后的表達表化。利用RT-PCR擴增SDNSF基因，克隆至pGEM-T載體，經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄法合成地高辛標記的正、反義SDNSFRNA探針。通過原位雜交，觀察SDNSFmRNA在大鼠脊髓中的表達位

2、置及在損傷脊髓中的表達變化。應用免疫組化的方法，顯示與原位雜交切片相鄰層面脊髓中nestin陽性細胞，觀察神經(jīng)干細胞在脊髓損傷后的反應，及其與SDNSF表達的關(guān)系。 結(jié)果：RT-PCR檢測SDNSFmRNA正常大鼠脊髓中有的表達，在損傷后4d，SDNSFmRNA表達上升，損傷8d到達高峰，此后SDNSFmRNA的表達逐漸減少，到16d恢復到正常水平；脊髓切片原位雜交結(jié)果發(fā)現(xiàn)SDNSFmRNA陽性細胞主要分布于脊髓灰質(zhì)細胞中，可能

3、是神經(jīng)元細胞，結(jié)果表明正常脊髓可表達SDNSF；脊髓損傷后8d，原位雜交顯示SDNSF陽性細胞明顯增多。同時與此切片相鄰的層面的切片免疫組化證實nestin陽性細胞增殖、變大、向周圍發(fā)出突起，但這些陽性細胞的位置與SDNSF無關(guān)系。 結(jié)論： 1.脊髓損傷后SDNSFmRNA在損傷脊髓中表達呈動態(tài)變化，4d表達上升，8d達高峰，12d下降，16d左右基本恢復正常。SDNSF是一種在脊髓損傷以后表達發(fā)生變化的基因，主要表達在