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文檔簡介
1、研究目的:通過構(gòu)建過表達NMDA受體NR1亞基的293T細胞，實現(xiàn)一種成本較低的檢測抗NMDA受體自身抗體的檢測方法，并在實驗室內(nèi)初步進行抗NMDA受體腦炎患者抗體檢測并與商品化試劑盒進行比較驗證檢測效率。
研究方法:1、對攜帶GRIN1基因的載體質(zhì)粒進行PCR擴增，獲得GRIN1全長編碼序列，然后通過酶切、連接將該序列接入FUGW質(zhì)粒載體，獲得FUGW-GRIN1-IRES-EGFP質(zhì)粒。2、將連接后載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌，
2、進行質(zhì)粒擴增，收集并鑒定質(zhì)粒。3、通過四質(zhì)粒系統(tǒng)將FUGW-GRIN1-IRES-EGFP轉(zhuǎn)染293T細胞，進行慢病毒包裝。4、待293T細胞內(nèi)病毒包裝、釋放完畢，收集含病毒載體的細胞培養(yǎng)液，通過離心收集病毒。5、用攜帶GRIN1基因的慢病毒載體感染目標細胞293T細胞并驗證GRIN1基因表達。6、以實驗室保存的經(jīng)檢測抗NMDA受體抗體陽性以及陰性的病人腦脊液樣本孵育表達GRIN1的293T細胞，并進行免疫熒光檢測，分析樣本中的抗體情況
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