可口革囊星蟲纖溶酶基因的表達及優(yōu)化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、 學(xué)校代碼: 10385 分類號: 研究生學(xué)號: 1300203060 密 級: 可口革囊星蟲纖溶酶基因的表達及優(yōu)化 可口革囊星蟲纖溶酶基因的表達及優(yōu)化 Gene Expression and Optimization of Fibrinolyti

2、c Enzyme in Phasolosma esculenta 作者姓名: 溫春光 溫春光 指導(dǎo)教師: 許瑞安 許瑞安教授 教授 合作教師: 李少欽 李少欽教授 教授 學(xué) 科: 生物學(xué)( 生物學(xué)(微生物 生物學(xué)) 研究方向: 基因工程與海洋藥物 基因工程與海洋藥物 所在學(xué)院: 生物醫(yī)學(xué)學(xué)院 生物醫(yī)學(xué)學(xué)院 論文提交日期:二

3、零一 二零一六年三月二十 二十八日 摘要 I 摘 要 血栓性疾病對人類生活的影響越來越大,嚴重危害著人類的健康,開發(fā)新型有效的溶栓試劑迫在眉睫。而纖溶酶是溶栓藥物的主要來源。關(guān)于溶栓藥物的開發(fā)已經(jīng)歷了四代, 各有其優(yōu)缺點。 海洋源纖溶酶的來源非常廣, 包括動物、植物、 微生物均可見報道。 本實驗室前期從海洋星蟲-可口革囊星蟲腸道中提取得到一種具有纖溶活性較強的酶, 并且測得其 N 端的氨基酸序列, 結(jié)合 5’RACE和 3’RACE

4、技術(shù)得到了兩條纖溶酶序列,分別命名為 PFE-1 和 PFE-2。本課題就是對 PFE-2 進行外源的表達。 成功構(gòu)建了原核表達載體 pET-22b(+)-PFE-2,乳糖誘導(dǎo)表達,但是重組蛋白無活性;隨后又構(gòu)建了帶組氨酸標簽的表達載體 pET-22b(+)-PFE-2(his)和分子伴侶共表達,雖然相較于之前,重組蛋白的可溶性表達提高了,但是依舊無活性。 成功構(gòu)建構(gòu)建了真核表達載體 pPic9-PFE-2 和 pPic9-PFE-2(

5、his),隨即電轉(zhuǎn)于 畢 赤 酵母 GS115 之 后 , 篩選 出 了 兩株 工 程 菌 pPic9-PFE-2-GS115 和pPic9-PFE-2(his)-GS115,甲醇誘導(dǎo)表達,纖維平板實驗結(jié)果出現(xiàn)了透明圈,說明重組蛋白纖溶活性良好。所以采用真核表達系統(tǒng)要優(yōu)于原核表達系統(tǒng)。 研究結(jié)果說明采用真核表達系統(tǒng)可以表達出有纖溶活性的重組纖溶酶,活性良好,這也拓寬了海洋源的纖溶酶庫,并且也尋找出了一條采用外源表達系統(tǒng)表達 PFE-2

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