TLR4基因多態(tài)性及信號轉(zhuǎn)導相關因子與軍團菌感染的關系.pdf

1、目的：
　　 ①初步探討TLR4基因(2244G→A)位點多態(tài)性與軍團菌感染的關系。②了解MyD88 mRNA表達與軍團菌感染的關系；探討TLR4基因(2244G→A)位點基因多態(tài)性與MyD88 mRNA表達的關系。③了解IFN-β、IL-10與軍團菌感染的關系；探討TLR4基因(2244G→A)位點基因多態(tài)性與IFN-β、IL-10表達的關系。
　　 方法：
　　 ①采用聚合酶鏈反應（PCR）擴增肺部感染患者尿

2、液中軍團菌屬特異性16SrRNA基因，酶免疫檢測法(EIA)檢測其尿液中血清1型嗜肺軍團菌抗原（Lp1尿抗原），軍團菌感染的判定標準為Lp1尿抗原陽性或16SrRNA基因擴增陽性。
　　 ②采用PCR-RFLP 技術檢測25例軍團菌感染者、66例其它非革蘭氏陰性菌引起的肺部感染者（病人對照組）、102例健康體檢者的TLR4基因(2244G→A)位點多態(tài)性。
　　 ③采用real-time RT-PCR 方法檢測軍團菌感染

3、組、病人對照組和健康人對照組MyD88 mRNA的表達水平，分析PBMC中MyD88 mRNA與軍團菌感染的關系及TLR4基因（2244 G→A）位點基因多態(tài)性與MyD88 mRNA表達的關系。
　　 ④采用ELISA 法檢測軍團菌感染組、病人對照組和健康人對照組IFN-β、IL-10濃度，分析IFN-β、IL-10與軍團菌感染的關系及TLR4基因(2244G→A)位點基因多態(tài)性與IFN-β、IL-10的關系。
　　 結

4、果：
　　 ①健康人對照組TLR4 (2244G→A)位點A等位基因發(fā)生頻率（44.6％）高于病例組（34％）和病人對照組（36.4％），差異無統(tǒng)計學意義（χ 2=3.243，p=0.198）。
　　 病例組、病人對照組、健康人對照組TLR4 (2244G→A)位點三種基因型頻率差異無統(tǒng)計學意義（χ 2=6.003，p=0.199）；TLR4 (2244G→A)位點GG/ GA和AA基因型頻率在三組分布差異未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學意

5、義（p=0.076），健康人對照組與病例組比較TLR4 (2244G→A)位點GG/GA和AA基因型頻率分布差異有統(tǒng)計學意義（p=0.044），AA基因型在健康人對照組的發(fā)生頻率比病例組高。
　　 ②病例組、病人對照組、健康人對照組三組人群PBMC中MyD88 mRNA的表達量差異有統(tǒng)計學意義（F=6.625, p=0.002）；病人對照組MyD88的表達量高于健康人對照組，差異有統(tǒng)計學意義(p=0.000)，病例組MyD88的

6、表達量高于健康人對照組，但未出現(xiàn)統(tǒng)計學差異（p=0.095），病例組和病人對照組MyD88的表達量差異無統(tǒng)計學意義（p=0.436）；病例組、病人對照組、健康人對照組TLR4(2244G→A)位點三種基因型間MyD88 mRNA表達量差異均未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學意義（p=0.408，p=0.235，p=0.174）；病人對照組、健康人對照組中AA基因型組MyD88mRNA表達量高于GG/GA基因型組，但未出現(xiàn)統(tǒng)計學意義（Z=-1.461, p=0

7、.144；Z=-1.791, p=0. 073）。
　　 ③病例組、病人對照組、健康人對照組三組人群IFN-β濃度差異有統(tǒng)計學意義（F=12.884，p=0.000），病例組和病人對照組IFN-β濃度均高于健康人對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(p=0.001, p=0.000），病例組和病人對照組IFN-β濃度差異無統(tǒng)計學意義（p=0.982），病例組和病人對照組IL-10濃度與健康人對照組比較均有不同程度的升高，但未出現(xiàn)統(tǒng)計學意義

8、（F=1.835,p=0.166）；病例組，病人對照組，健康人對照組三種基因型間IFN-β、IL-10濃度差異無統(tǒng)計學意義（p=0.506， p=0.497， p=0.260；p=0.399, p=0.1, p=0.223），病人對照組、健康人對照組中AA基因型組IFN-β濃度低于GG/GA基因型組，但未出現(xiàn)統(tǒng)計學差異（Z=-1.155,p=0.248；Z=-1.617,p=0.106）,病人對照組AA基因型組IL-10濃度高于GG/G

9、A基因型組，差異有統(tǒng)計學意義（Z=-2.132,p=0.032），健康人對照組AA基因型組IL-10濃度高GG/GA基因型組，但未出現(xiàn)統(tǒng)計學差異（Z=-0.981,p=0.326）。
　　 結論：
　　 ①TLR4 (2244G→A)位點GG/GA與AA基因型頻率在三組分布有差異，健康人對照組AA基因型發(fā)生頻率高于病例組，提示TLR4 (2244G→A)位點多態(tài)性與軍團菌感染易感性可能有關。
　　 ②病例組和病人

10、對照組PBMC中MyD88的表達量高于健康人對照組，提示軍團菌感染及其他非革蘭氏陰性菌感染可能引起MyD88 mRNA表達升高；病人對照組、健康人對照組中AA基因型組MyD88 mRNA表達量高于GG/GA基因型組，提示TLR4 （2244 G→A）位點基因多態(tài)性與MyD88 mRNA表達可能有關。
　　 ③病例組和病人對照組IFN-β濃度均高于健康人對照組，病例組和病人對照組IL-10濃度與健康人對照組比較均有不同程度的升高，