TLR4基因的變異分析及TLRs基因與雞沙門氏菌感染的相關(guān)性研究.pdf

1、沙門氏菌血清型眾多，在自然界中分布廣泛，可以感染不同日齡的雞，雛雞更容易感染該菌且死亡率較高，成年雞感染該菌后很少引起嚴(yán)重的臨床疾病，但會(huì)導(dǎo)致體重減輕、產(chǎn)蛋率下降、腹瀉和生殖道病變，給畜禽養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)很大損失。人誤食沙門氏菌污染的肉、蛋、奶等食物會(huì)感染沙門氏菌而引發(fā)食物中毒，造成嚴(yán)重的公共衛(wèi)生危機(jī)。選育抗沙門氏菌的品種雞，建立健康的種雞群，是解決這一問(wèn)題的關(guān)鍵。
　　 Toll樣受體(TLRs)是連接天然免疫和獲得性免疫的橋梁，T

2、LRs在抗細(xì)菌感染，引發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答中起著非常重要的作用。本研究旨在探索地方雞種TLR4基因的遺傳多態(tài)性，以不同雞種TLR4遺傳差異為切入點(diǎn)，進(jìn)行鼠傷寒沙門氏菌接種試驗(yàn)，研究壽光雞和濟(jì)寧百日雞的抗沙門氏菌差異，有助于我們揭示地方雞種抗病特性，為家禽抗病遺傳育種奠定基礎(chǔ)。
　　 本研究以山東省地方雞種濟(jì)寧百日雞、萊蕪黑雞、蘆花雞、魯西斗雞、壽光雞及商品雞海蘭褐和AA肉雞為試驗(yàn)材料，采用直接混池測(cè)序法發(fā)掘TLR4基因外顯子上的SNP

3、s。根據(jù)多態(tài)位點(diǎn)對(duì)TLR4蛋白功能的影響，選擇多態(tài)性位點(diǎn)C77T和G247A，利用直接測(cè)序法對(duì)所有試驗(yàn)雞進(jìn)行基因分型。結(jié)果表明，在7個(gè)雞群中TLR4基因共發(fā)現(xiàn)了17個(gè)SNPs，第一外顯子上1個(gè)，第二外顯子上2個(gè)，第三外顯子上14個(gè)。對(duì)所有試驗(yàn)雞第一、二外顯子上的非同義突變位點(diǎn)C77T和G247A進(jìn)行多態(tài)性分析，C77T位點(diǎn)在蘆花雞偏離Hardy-Weinberg平衡，在其它4個(gè)地方雞種和2個(gè)商業(yè)品種都處于Hardy-Weinberg平衡

4、，其多態(tài)信息含量在壽光雞最高;G247A位點(diǎn)在5個(gè)地方雞種中均處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)，而在兩個(gè)商業(yè)品種都偏離Hardy-Weinberg平衡，其多態(tài)信息含量在壽光雞最低。
　　 為比較壽光雞和濟(jì)寧百日雞兩個(gè)品種雞對(duì)抗沙門氏菌感染的差異，選取沙門氏菌陰性的1日齡壽光雞和濟(jì)寧百日雞，隨機(jī)分為兩組，分別接種0.3mL的磷酸鹽緩沖液和鼠傷寒沙門氏菌菌液。壽光雞接種后第1、3、7和14天進(jìn)行血清抗體水平檢測(cè)、接種后第7天

5、空腸、回腸、盲腸和十二指腸四種腸組織TLR4基因表達(dá)測(cè)定，并對(duì)所有試驗(yàn)雞進(jìn)行基因分型與抗體水平進(jìn)行相關(guān)性分析。濟(jì)寧百日雞接種后第1、3和7天進(jìn)行血清抗體水平檢測(cè)、盲腸和脾臟TLR4、5、15和21基因表達(dá)測(cè)定和接種后第7天十二指腸形態(tài)學(xué)變化檢測(cè)。結(jié)果顯示，兩個(gè)品種雞對(duì)照組之間，在接種后第1和3天，壽光雞血清抗體水平顯著高于濟(jì)寧百日雞，而接種后第7天其抗體水平顯著低于濟(jì)寧百日雞。壽光雞盲腸中TLR4基因的表達(dá)量在接種后第1和7天顯著低于濟(jì)

6、寧百日雞，而接種后第3天兩雞種其表達(dá)量差異不顯著;兩個(gè)品種雞試驗(yàn)組之間，接種后第1和3天，血清抗體水平及盲腸中TLR4基因表達(dá)量差異不顯著，但接種后第7天，濟(jì)寧百日雞血清抗體水平和盲腸TLR4基因表達(dá)量均顯著高于壽光雞。
　　 壽光雞TLR4基因C77T和G247A位點(diǎn)不同基因型及不同組合基因型(CC/GG和CT/GG)與血清抗體水平相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，在相同時(shí)間點(diǎn)，不同基因型及組合基因型的抗體水平差異不顯著;但隨著時(shí)間變化，不同基

7、因型及組合基因型的抗體水平差異極顯著。接種后第7天壽光雞不同腸組織TLR4表達(dá)量差異極顯著，十二指腸TLR4基因表達(dá)量最高，盲腸TLR4表達(dá)量最低。
　　 濟(jì)寧百日雞對(duì)照組和試驗(yàn)組的十二指腸絨毛長(zhǎng)度在接種后第3和7天差異極顯著，十二指腸絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度比值在接種后7天差異極顯著。其盲腸組織TLR5表達(dá)量在接種后第1和3天顯著高于對(duì)照組，TLR15表達(dá)量在接種后第3和7天差異極顯著，TLR21表達(dá)量在接種后第7天顯著高于對(duì)照組;