大黃素對(duì)TLR4基因介導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞LPS信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)理研究.pdf

1、目的:觀察在脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)下，腎小管上皮細(xì)胞對(duì)天然免疫Toll樣受體4（Toll-like receptor4 TLR4）和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子髓樣分化因子88（Myeloid differentiation factor88,MyD88）、核轉(zhuǎn)錄因子κB( Nuclear factor－kappa B,NF-κB)以及下游產(chǎn)物白細(xì)胞介素6（Interleukin－6，IL-6）、腫瘤壞死因子α(Tu

2、mor necrosis factorα，TNFα)的反應(yīng)，闡述在腎固有細(xì)胞中存在與其它炎癥細(xì)胞相同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，進(jìn)一步證實(shí)腎固有細(xì)胞參與腎臟免疫過(guò)程；同時(shí)探討大黃素在上述環(huán)節(jié)中的作用及途徑。
　　方法:原代培養(yǎng)的BALB/C小鼠腎小管上皮細(xì)胞，模型組用100ng/ml的LPS誘導(dǎo)，治療組在LPS誘導(dǎo)的同時(shí)，分別用0.1、0.2、0.4μg/ml濃度的大黃素干預(yù)，于24h后分別提取細(xì)胞總RNA及蛋白，用逆轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應(yīng)（Re

3、verse transcription-polymerase chain reaction，PT-PCR）檢測(cè)TLR4、MyD88、NF-ΚB以及TNFα、IL-6 mRNA的表達(dá)，并用免疫蛋白印跡（Western-blotting）檢測(cè)腎小管上皮細(xì)胞NF-κB蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:正常腎小管上皮細(xì)胞可見(jiàn)TLR4、MyD88、NF-κB以及TNFα、IL-6 mRNA低表達(dá)，用LPS刺激后，各因子表達(dá)均明顯上調(diào)（與正常組比，P<

4、0.05）,不同濃度大黃素干預(yù)后則TLR4、MyD88、NF-κB以及TNFα、IL-6 mRNA表達(dá)均明顯下降（與模型組比較，P<0.05），下降程度與大黃素濃度相關(guān)，部分存在一定的量效依賴(lài)關(guān)系；Western-blotting法顯示LPS誘導(dǎo)后，轉(zhuǎn)入核內(nèi)的NF-κB明顯增加（P<0.01），而大黃素干預(yù)后則活性NF-κB顯著減少（P<0.05）。
　　結(jié)論:腎小管上皮細(xì)胞本身能夠表達(dá)TLR4、MyD88、NF-ΚB以及TNFα