桂枝揮發(fā)油對(duì)TLR2、TLR4基因表達(dá)及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響.pdf

1、炎癥是臨床諸多急慢性疾病具有的主要病理過(guò)程之，或引起機(jī)體的防御反應(yīng) 一而被消除，或引發(fā)炎癥失控造成機(jī)體功能紊亂或器官損害。桂枝是樟科植物肉 托的嫩枝，自古以永主要應(yīng)用于“表證”等諸多疾病的防治。現(xiàn)代研究表明炎癥 是表證的重要病理改變之一，桂枝揮發(fā)油(the、Volatile oil ofRamulus Cinnamomi， VORG)是桂枝抗炎的主要有效部位群。課題組前期研究表明VORC對(duì)急性、慢 性、免疫損傷性炎癥均具有良好的

2、拮抗效果，其抗炎作用與拮抗炎癥因子生成和 釋放、抗氧化損傷等有關(guān)。近年來(lái)認(rèn)為炎癥就是炎癥免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)紊亂所致，Toll 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)尤其引人矚目。本研究主要進(jìn)行了VORC抗炎作用、對(duì)急性肺炎模型 肺組織Toll信號(hào)通路關(guān)鍵靶分子的影響以及多個(gè)炎癥信號(hào)通路“分子對(duì)話”靶點(diǎn) PTK活性影響的研究。 目的：探討VORC抗炎作用與Toll炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要靶點(diǎn)的關(guān)系，揭示VORC抗炎作用的分子信號(hào)機(jī)理，為中藥“辛味”理淪提供

3、現(xiàn)代科學(xué)依據(jù)。 方法：以LPS致大鼠急性肺炎等模型為研究載體，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、基因克隆技術(shù)、免疫酶聯(lián)吸附技術(shù)及病理組織形態(tài)學(xué)技術(shù)等研究于段，觀察了VORC抗炎作用、VORC對(duì)肺炎模型肺組織勻漿TLR2、TLR4、MYD88基因表達(dá)，P-I K B-α、NF-K B P65、TNF-α、IL-1β含量以及PTK活性的影響，從炎性信號(hào)識(shí)別內(nèi)化、胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)、易位入核、炎癥相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄、前炎癥因子的產(chǎn)生和不同炎癥信號(hào)的分子對(duì)話

4、等角度揭示VORC抗炎作用的分子轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)機(jī)制。 結(jié)果： 1.VORC抗炎作用研究研究表明，VORC對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹、醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性亢進(jìn)、角叉菜膠致大鼠足腫脹和LPS致大鼠急性肺損傷等急性炎癥均有顯著的拮抗作用。 2.VORC對(duì)TLR2、TLR4、MYD88mRNA表達(dá)的影響研究表明，正常SD大鼠肺組織中有少量的TLR2、TLR4、MYD88mRNA表達(dá)，LPS尾靜脈注射后6h肺組織勻漿中T

5、LR2、TLR4、MYD88mRNA表達(dá)顯著高于空白組(P<0.05),VORC高、中、低三個(gè)劑量均可以顯著抑制急性肺炎模型肺組織勻漿中的TLR2、TLR4,MYD88mRNA表達(dá)(P<0.05)。 3.VORC對(duì)P-I K B-a、NF-K B P65含量的影響 研究表明，正常SD人鼠 肺組織勻漿中P-I KB-a、NF-K B P65含量較低，LPS尾靜脈注射6h后腫組織 勻漿中P-I K B-a、NF-K B P65

6、含量顯著高于空白組(P<0.05)，VORC高、中、 低三個(gè)劑量組肺組織勻漿中的P-I K B-a、NF-K B P65均顯著降低，與模型組比 較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。 4.VORC對(duì)TNF-a、lL-1 β含量的影響 研究表明，LPS尾靜脈注射6h后 肺組織勻漿中前炎癥因子TNF-I、1L-1 β含量較空白組顯著增高，兩者比較有 顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，除VORC高劑量對(duì)TNF-a影

7、響不顯著外，其余各 組 TNF-a、IL-1 β的含量均顯著低于模型組，二者相比有顯著統(tǒng)汁學(xué)意義 (P<0.05或P<0.01)。 5.VORC對(duì)PTK活性的影響研究表明，SD人鼠正常肺組織中PTK含量為44.2l±31.5 Jpmol／ml；模型組含量為173.58±97.95pmoI／ml，較空白組顯著增高，具有極顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；VORC高、中、低三個(gè)劑量組PTK含量均較模型組顯著降低(P<0

8、.05)，有一定的量效關(guān)系。 結(jié)論： 1.結(jié)合課題組前研究成果，VORC對(duì)急性、慢性和免疫損傷性炎癥反應(yīng)均具有明顯的拮抗作用，說(shuō)明VORC抗炎作用確鑿。 2.VORC 對(duì)急性肺炎模型肺組織中TLR2／4和MYD88mRNA表達(dá)均有顯著的抑制作用、對(duì)P-1 K B-a、NF-K B P65含量增高亦有顯著的拮抗效應(yīng)，同時(shí)能夠顯著抑制前炎癥因子TNF-a、lL-1 β的含量的升高，說(shuō)明VORC對(duì)LPS／TLRs炎癥信號(hào)