生脈注射液誘導(dǎo)心肌組織內(nèi)干細(xì)胞分化與體外循環(huán)心肌保護(hù).pdf

1、以往認(rèn)為,心臟為終末分化器官,其細(xì)胞本身不具有增殖分化功能,因此無(wú)法修復(fù)損傷心肌。但隨著細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)步以及人們研究的深入,心臟中存在心肌干細(xì)胞(CSC)的觀念已經(jīng)越來(lái)越多地為醫(yī)學(xué)工作者們所接受。本研究將含不同濃度生脈注射液的培養(yǎng)基用于培養(yǎng)心肌組織來(lái)源細(xì)胞,觀察該藥能否在體外誘導(dǎo)心肌組織內(nèi)干細(xì)胞分化,并通過(guò)臨床試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)生脈注射液具有減輕心肌缺血-再灌注損傷的作用,同時(shí)探討其體外循環(huán)心肌保護(hù)作用是否與誘導(dǎo)心肌組織內(nèi)干細(xì)胞分化存在

2、關(guān)聯(lián)。
　　 第一部分生脈注射液促進(jìn)人心肌組織內(nèi)干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)
　　 目的:成功培養(yǎng)人心肌組織來(lái)源細(xì)胞,嘗試提取人CSC,觀察生脈注射液是否具有誘導(dǎo)干細(xì)胞分化的作用,為后期的臨床研究奠定基礎(chǔ);
　　 方法:選擇行心臟手術(shù)的病人,將術(shù)中切除的心肌組織保留,用組織塊消化法提取細(xì)胞,通過(guò)體外擴(kuò)增后用免疫磁珠法分選人心肌組織來(lái)源干細(xì)胞,并嘗試用不同濃度生脈注射液干預(yù)細(xì)胞,利用免疫熒光的方法檢測(cè)心肌特異性轉(zhuǎn)

3、錄因子和心肌特異性蛋白,進(jìn)一步驗(yàn)證生脈注射液的誘導(dǎo)干細(xì)胞分化作用;
　　 結(jié)果:從人心肌組織中成功提取細(xì)胞,并在體外擴(kuò)增,但未能成功分選人CSC,免疫熒光法證實(shí)5μl/ml和10μl/ml生脈注射液可以誘導(dǎo)心肌組織內(nèi)干細(xì)胞分化,濃度增大后誘導(dǎo)效率稍有下降;
　　 結(jié)論:適當(dāng)濃度的生脈注射液可以誘導(dǎo)心肌組織內(nèi)干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞,但由于CSC本身含量極低,因此未能成功將其分選出來(lái)。
　　 第二部分生脈注射液在體外循

4、環(huán)心肌保護(hù)中的作用
　　 目的:通過(guò)臨床研究,證實(shí)生脈注射液可以減輕體外循環(huán)誘發(fā)的缺血再灌注損傷,觀察體內(nèi)試驗(yàn)中生脈注射液是否可以誘導(dǎo)心肌組織內(nèi)干細(xì)胞分化為心肌組織;
　　 方法:選擇行心臟手術(shù)的病人,分別選擇術(shù)前、術(shù)中及術(shù)后的六個(gè)時(shí)間點(diǎn)抽取血液,檢測(cè)血清中SOD、MDA、cTnI和CK-MB水平,術(shù)中切除小塊心肌組織,用免疫熒光的方法檢測(cè)其中心肌特異性轉(zhuǎn)錄因子(GATA4、Nkx2.5)和特異性蛋白(Cx43、cTnI

5、);
　　 結(jié)果:入院時(shí)兩組患者血清SOD活力、MDA水平無(wú)明顯差異,而手術(shù)開(kāi)始時(shí)試驗(yàn)組血清SOD活力顯著高于對(duì)照組,術(shù)后一天時(shí)試驗(yàn)組血清MDA水平顯著低于對(duì)照組,而試驗(yàn)組和對(duì)照組血清cTnI和CK-MB水平有顯著差異;試驗(yàn)組GATA-4和NKx2.5熒光強(qiáng)度顯著強(qiáng)于對(duì)照組,試驗(yàn)組的cTnT和Cx43仍然趨向較強(qiáng)的熒光信號(hào),但無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;
　　 結(jié)論:生脈注射液可以增強(qiáng)血清中SOD活力及減少脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),抑制體外

6、循環(huán)過(guò)程中的缺血再灌注損傷,而心肌組織內(nèi)干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞可能也參與了體外循環(huán)心肌保護(hù)。
　　 第三部分我國(guó)大陸地區(qū)主動(dòng)脈夾層發(fā)病特征——文獻(xiàn)綜合分析及與主動(dòng)脈夾層國(guó)際注冊(cè)研究資料進(jìn)行對(duì)比
　　 目的:急性主動(dòng)脈夾層(AAD)是一種致死率和致殘率高的臨床急癥。為了加深對(duì)該病的認(rèn)識(shí),提高診治水平,國(guó)際主動(dòng)脈夾層注冊(cè)研究(IRAD)于1996年成立。中國(guó)大陸(MC)是世界上人口最多的地區(qū),每年新發(fā)AAD病人越來(lái)越多,由于I

7、RAD病例均來(lái)源于發(fā)達(dá)的西方國(guó)家,醫(yī)療體制、經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平和人種都與MC有所不同,因此該病在IRAD和MC兩個(gè)群體之間的差異可能被忽略。
　　 方法:我們通過(guò)檢索PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)和中國(guó)全文期刊數(shù)據(jù)庫(kù),通過(guò)一定的標(biāo)準(zhǔn),分別選取了來(lái)自IRAD和MC的臨床報(bào)告,以求助或者購(gòu)買來(lái)獲得全文。根據(jù)數(shù)據(jù)性質(zhì)不同,分別采用t檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)或Fisher精確概率計(jì)算等方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì),所有統(tǒng)計(jì)過(guò)程應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行。
　　 結(jié)果:來(lái)

8、自MC的AAD病人較IRAD組病人顯著年輕,且前者中男性病人比例也高于后者(80.7％vs68.6％,P＜0.001)。中國(guó)病人更可能出現(xiàn)非典型癥狀和體征。與IRAD相比,中國(guó)醫(yī)師更愿意選擇磁共振來(lái)進(jìn)行.AAD的診斷(45.5％vs11.6％,P＜0.001)?？傮w上來(lái)說(shuō),兩組住院期間死亡率類似,但是由于研究方法的限制,相當(dāng)一部分來(lái)自MC的病例未能參與統(tǒng)計(jì),并且中國(guó)病人接受治療的比例也較低。
　　 結(jié)論:通過(guò)初步觀察和分析,我們