熱休克蛋白90抑制劑DMAG對白血病細胞株HL-60的作用研究.pdf

1、目的：研究熱休克蛋白90(HSP90)新型抑制劑17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格爾德霉素(17-dimethylaminoethylamino-17-demethoxygeldanamycin，DMAG)對白血病細胞株HL-60的抑制作用及相關(guān)作用機制，并探討DMAG與化療藥物柔紅霉素(DNR)聯(lián)合應用的協(xié)同性。 方法：對DMAG作用后的HL-60細胞在光鏡、透射電鏡下觀察形態(tài)學變化；通過MTT法、流式細胞術(shù)檢測細胞在DMA

2、G和DNR作用下增殖情況及凋亡率的改變；運用流式細胞術(shù)檢測DMAG作用后的HL-60細胞周期的改變；對DMAG作用后的HL-60細胞應用流式細胞術(shù)及Westen Blot法檢測Raf蛋白含量，應用RT-PCR法檢測raf-mRNA表達量的變化，探討DMAG的作用機制。 結(jié)果：DMAG作用后的HL-60細胞光鏡下體積變小、不規(guī)則，細胞密度降低，電鏡下超微結(jié)構(gòu)出現(xiàn)染色質(zhì)濃集、沿核膜形成收縮的新月狀體等凋亡表現(xiàn)。MTT法檢測顯示DMA

3、G能抑制HL-60細胞的生長，并且隨著藥物濃度的升高、作用時間的延長抑制率明顯提高，具有濃度、時間依賴性，72h半數(shù)抑制濃度(IC50)為0.488μM；DMAG與DNR對HL-60細胞的生長抑制具有協(xié)同作用，兩藥相互作用指數(shù)(CDI)<1.0，二者一起作用時對HL-60細胞的抑制率明顯提高，流式細胞術(shù)也顯示聯(lián)合應用能引起更多HL-60細胞的凋亡。應用流式細胞術(shù)對HL-60細胞周期分析顯示，DMAG作用后G0/G1期細胞明顯增多，S期細