漆姑草提取物對(duì)人白血病細(xì)胞株HL-60和K562誘導(dǎo)分化作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究漆姑草提取物（HSJ）對(duì)人早幼粒白血病細(xì)胞HL-60和人慢性髓系白血病細(xì)胞K562的誘導(dǎo)分化作用，并探討其誘導(dǎo)分化的作用機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)設(shè)置藥物組（2000、1000、500、250、125、62.5μg/mL HSJ）、陽(yáng)性藥對(duì)照組（100μg/mL吡柔比星）、陰性對(duì)照組，MTT法檢測(cè)HSJ作用HL-60和K562細(xì)胞24、48、72 h的增殖抑制率。根據(jù)MTT結(jié)果設(shè)置藥物組（250、125、62.5μg/mL

2、HSJ）和陰性對(duì)照組，經(jīng)HSJ作用HL-60和K562細(xì)胞48 h后，采用NBT還原實(shí)驗(yàn)法分別測(cè)定HL-60和K562細(xì)胞分化能力；瑞氏-吉姆薩染色法分別觀察HL-60和K562細(xì)胞形態(tài)的變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HL-60細(xì)胞分化相關(guān)抗原CD11b和CD14陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)率以及K562細(xì)胞分化相關(guān)抗原CD11b、CD14、CD41a和CD42b陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)率；Western-Blot法檢測(cè)HL-60細(xì)胞c-myc蛋白表達(dá)以及K562細(xì)胞G

3、ATA1和PU.1蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：1. HSJ對(duì)HL-60細(xì)胞誘導(dǎo)分化研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果：（1）HSJ能夠抑制HL-60細(xì)胞的增殖，經(jīng) HSJ作用24 h、48 h和72 h后的IC50分別為251、156和102μg/mL。（2）NBT還原實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HSJ能增加HL-60細(xì)胞的NBT還原能力，與陰性對(duì)照組的NBT還原率（0.83±0.29）%相比，HSJ（250、125、62.5μg/mL）組的NBT還原率（16.67±1.

4、76）%、（10.83±1.26）%、（6.00±0.87）%提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（3）瑞氏-吉姆薩染色觀察細(xì)胞形態(tài)發(fā)現(xiàn)，與陰性對(duì)照組比較，給藥組 HL-60細(xì)胞核漿比例減小，核仁變?yōu)槟I形或蠶豆形，出現(xiàn)明顯的細(xì)胞分化形態(tài)。（4）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HL-60細(xì)胞分化相關(guān)抗原陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)率發(fā)現(xiàn)，和陰性對(duì)照組的CD11b陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（41.13±0.42）%比較，HSJ（250、125、62.5μg/mL）組的CD11b

5、陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（66.77±4.27）%、（52.27±0.95）%、（46.27±0.38）%增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；和陰性對(duì)照組的CD14陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（53.30±7.23）%比較，HSJ（250、125、62.5μg/mL）組的CD14陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（96.63±0.23）%、（85.25±3.80）%、（63.84±0.78）%增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（5）Western-Blot法檢測(cè) H

6、L-60細(xì)胞分化相關(guān)蛋白c-myc的表達(dá)顯示，和陰性對(duì)照組的c-myc蛋白表達(dá)（0.71±0.02）相比， HSJ（250、125、62.5μg/mL）組c-myc蛋白表達(dá)（0.38±0.01、0.45±0.01、0.58±0.02）降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。2. HSJ對(duì)K562細(xì)胞誘導(dǎo)分化研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果：（1）HSJ能夠有效抑制K562細(xì)胞的增殖，經(jīng) HSJ作用24 h、48 h和72 h后的IC50分別為1

7、95、112和80μg/mL。（2）NBT還原實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HSJ能增加K562細(xì)胞的NBT還原能力，與陰性對(duì)照組的NBT還原率（0.92±0.17）%相比，HSJ（250、125、62.5μg/mL）組的NBT還原率（23.47±3.15）%、（9.33±2.56）%、（4.00±0.47）%提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（3）瑞氏-吉姆薩染色觀察細(xì)胞形態(tài)發(fā)現(xiàn)，與陰性對(duì)照組比較，給藥組K562細(xì)胞核漿比例減小，出現(xiàn)分葉狀細(xì)

8、胞核，部分細(xì)胞核凹陷，出現(xiàn)明顯的細(xì)胞分化形態(tài)。（4）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) K562細(xì)胞分化相關(guān)抗原陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)率，和陰性對(duì)照組的CD11b陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（58.70±9.60）%比較，HSJ（250、125、62.5μg/mL）組的CD11b陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（97.53±3.26）%、（90.93±1.90）%、（78.30±6.62）%增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；和陰性對(duì)照組的CD14陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（52.43±5.40）%比

9、較，HSJ（250、125μg/mL）組的CD14陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（94.57±2.37）%、（83.05±6.86）%增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；和陰性對(duì)照組的CD41a陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（53.37±8.03）%比較，HSJ（250、125μg/mL）組的CD41a陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（94.57±2.25）%、（86.07±3.68）%增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；和陰性對(duì)照組的CD42b陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（46.10±

10、10.32）%比較，HSJ（250、125、62.5μg/mL）組的CD42b陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（94.47±4.05）%、（84.33±2.73）%、（69.63±6.88）%增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（5） Western-Blot法檢測(cè)K562細(xì)胞分化相關(guān)蛋白表達(dá)顯示，和陰性對(duì)照組的GATA-1蛋白表達(dá)（0.02±0.01）相比，HSJ（250、125、62.5μg/mL）組的GATA-1蛋白表達(dá)（0.63±0.04、

11、0.57±0.03、0.18±0.02）增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；和陰性對(duì)照組的PU.1蛋白表達(dá)（0.01±0.01）相比，HSJ（250、125、62.5μg/mL）組的PU.1蛋白表達(dá)（0.53±0.02、0.17±0.03、0.11±0.01）增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論： HSJ對(duì)HL-60和K562細(xì)胞具有一定誘導(dǎo)分化作用，其能誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞向成熟粒細(xì)胞、單核細(xì)胞方向分化；誘導(dǎo)