miRNA-21改善3T3-L1脂肪細胞模型的胰島素抵抗及機制研究.pdf

1、目的:通過高糖高胰島素培養(yǎng)誘導3T3-L1脂肪細胞株構建胰島素抵抗(insulin resistance，IR)模型，觀察IR脂肪細胞miR-21表達量的變化及脂肪細胞miR-21表達增加對IR的改善作用，并初步探討其改善脂肪細胞胰島素敏感性的部分機制。
　　方法:
　　(1)通過傳統(tǒng)的雞尾酒方法誘導3T3-L1前脂肪細胞分化成熟脂肪細胞;
　　(2)將成熟3T3-L1脂肪細胞分為正常糖低INS(NGLI)組、正常糖高

2、INS(NGHI)組、高糖低INS(HGLI)組、高糖高INS(HGHI)組，應用氚標記的2-脫氧葡萄糖(2-3H-DG，2-DG)攝取試驗檢測脂肪細胞INS敏感性，通過高糖高胰島素處理建立3T3-L1成熟脂肪細胞IR模型;
　　(3)將IR脂肪細胞分為3組:IR組、轉染含pmiR-21質(zhì)粒轉染組(pmiR-21)、轉染空質(zhì)粒轉染組(pNC)，并設立對照組（正常脂肪細胞），實時熒光定量RT-PCR技術檢測各組脂肪細胞miR-21表

3、達水平差異;
　　(4)應用2-DG攝取試驗檢測以上各組脂肪細胞的INS敏感性;
　　(5)Western blot技術檢測各組脂肪細胞PTEN蛋白、Akt蛋白以及p-Aktser473蛋白水平的差異。
　　結果:
　　(1)3T3-L1前脂肪細胞分化成熟，誘導第10天油紅O染色可見呈圓形或橢圓形，細胞漿內(nèi)大量紅色脂滴聚集的分化成熟的3T3-L1脂肪細胞;
　　(2) NGHI組與NGLI組相比3T3-L1

4、細胞INS刺激葡萄糖攝取無顯著差異(P＞0.05)。HGLI組的3T3-L1細胞INS刺激葡萄糖攝取與NGLI組相比減少(P＜0.05)。HGHI組與NGHI組相較葡萄糖攝取減少(P＜0.05)。HGHI組與NGLI組3T3-L1脂肪細胞葡萄糖攝取率相比明顯減少(P＜0.01);
　　(3) IR組miR-21表達較對照組下降(P＜0.05)，pmiR-21組miR-21的表達與對照組相比，表達量無顯著差異（P＞0.05），pmi

5、R-21組與IR組比較，miR-21表達量增加(P＜0.05)。pNC組與對照組相比表達下降(P＜0.05)，與IR組比較表達量無顯著差異（P＞0.05）;
　　(4) IR組與對照組比較，INS刺激葡萄糖攝取率減少(P＜0.05)。pmiR-21組與對照組相比，INS刺激葡萄糖攝取率無顯著差異(P＞0.05)，與IR組比較攝取增加（P＜0.05）。pNC組脂肪細胞與對照組比較INS刺激葡萄糖攝取率減少(P＜0.05)，與IR組相

6、比無顯著差異（P＞0.05），與pmiR-21組相比較減少（P＜0.05）;
　　(5) IR組3T3-L1脂肪細胞與對照組相比PTEN蛋白的表達量增加(P＜0.05)，p-Aktser473表達減少（P＜0.05）。pmiR-21組與對照組相比，PTEN及p-Aktser473表達均無顯著差異（P＞0.05），與IR組比較PTEN表達減少（P＜0.05），p-Aktser473表達增加（P＜0.05）。pNC組與對照組相比PTE

7、N表達增加(P＜0.05)，p-AktSer473表達減少(P＜0.05)，與IR組比較PTEN及p-Aktser473表達無顯著差異(P＞0.05)。各組脂肪細胞的Akt表達無顯著差異（P＞0.05）。
　　結論:
　　(1)高糖高INS誘導3T3-L1脂肪細胞產(chǎn)生IR，miR-21表達減少，PTEN蛋白表達增加，p-Aktser473表達減少，Akt表達無明顯改變;
　　(2)轉染pmiR-21使miR-21在IR