胰島素對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞HDL生成相關(guān)功能蛋白ABCA1的影響及機(jī)制研究.pdf

1、背景與目的：動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病是導(dǎo)致人類死亡的首要原因。而血脂異常是其最主要的危險(xiǎn)因素之一。盡管他汀類藥物的有效使用，甚至是劑量的加倍，且當(dāng) LDL-C降至70mg/dL以下時(shí)，心血管剩余風(fēng)險(xiǎn)仍然存在。因此，為了更進(jìn)一步降低心血管剩余風(fēng)險(xiǎn)，人們逐漸又開(kāi)始了對(duì)其他影響心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)因素的探索，如HDL-C。高胰島素血癥/胰島素抵抗是動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病的主要危險(xiǎn)因素。HDL水平的降低常是高胰島素血癥最主要血脂譜改變之一，但其具體

2、機(jī)制仍不明確。本研究以3T3-L1脂肪細(xì)胞為研究對(duì)象，旨在討論高胰島素環(huán)境對(duì)HDL生成相關(guān)功能蛋白ABCA1的影響，并且探索其具體信號(hào)通路機(jī)制，為心血管剩余風(fēng)險(xiǎn)的干預(yù)提供新的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)證據(jù)。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)以3T3-L1前脂肪細(xì)胞為研究對(duì)象，通過(guò)“雞尾酒法”誘導(dǎo)分化為成熟的脂肪細(xì)胞；予以不同濃度的胰島素（0 nmol/L、10 nmol/L、102nmol/L、103nmol/L）刺激，利用葡萄糖氧化酶法（GOD）檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基剩

3、余葡萄糖含量以確定是否成功建立胰島素抵抗模型；利用液體閃爍計(jì)數(shù)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞3H標(biāo)記膽固醇流出；采用SYBR Green I嵌合熒光法通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)檢測(cè)不同濃度的胰島素對(duì)3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞ABCA1 mRNA表達(dá)的影響；利用Western blot技術(shù)檢測(cè)胰島素對(duì)3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞ABCA1蛋白表達(dá)的影響及相關(guān)機(jī)制研究。
　　結(jié)果：1.與對(duì)照組相比，胰島素濃度為103 nmol/L條件下，細(xì)胞培養(yǎng)基上清剩余葡萄糖增

4、多（P<0.01），提示胰島素抵抗模型建立。
　　2.胰島素能呈濃度和時(shí)間依賴性抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞膽固醇的流出（P<0.05）。
　　3.不同濃度的胰島素對(duì)ABCA1 mRNA的調(diào)控?zé)o影響（P>0.05）。
　　4.胰島素能呈濃度和時(shí)間依賴性下調(diào)ABCA1蛋白的表達(dá)（P<0.05）。
　　5.胰島素是通過(guò)calpain或proteasome途徑促進(jìn)ABCA1蛋白降解。
　　6.胰島素能呈濃度依賴性促進(jìn)