亞慢性砷暴露對(duì)小鼠腦組織線粒體Sdha表達(dá)影響.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:研究亞慢性砷暴露對(duì)小鼠腦組織線粒體復(fù)合體ⅡSdha的表達(dá)影響,為探討砷的神經(jīng)毒性機(jī)制提供分子毒理學(xué)依據(jù)。 方法:SPF級(jí)小鼠50只,雌雄各半,體重26.3-30.9g。按體重將小鼠隨機(jī)分為5組:1ppm三氧化二砷(As2O3)染毒組;4ppmAs2O3染毒組;?;撬峥寡趸深A(yù)組(4ppmAs2O3+150mg/L牛磺酸)和維生素C抗氧化干預(yù)組(4ppmAs2O3+45mg/L維生素C);蒸餾水對(duì)照組。動(dòng)物自然飲水和飲食,室

2、溫18~25℃。通過(guò)飲用含不同濃度As2O3蒸餾水的方式使小鼠暴露于砷。保護(hù)劑是以灌胃方式投給,每星期2次。連續(xù)染毒60天,頸椎脫臼法處死小鼠。應(yīng)用免疫組織化學(xué)8一羥基脫氧鳥(niǎo)嘌呤(8-OH-dG)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠腦組織氧化性損傷。應(yīng)用電鏡技術(shù)觀察砷暴露小鼠腦組織線粒體的超微結(jié)構(gòu)變化。應(yīng)用基因芯片技術(shù)篩選染砷小鼠腦組織線粒體呼吸鏈復(fù)合體差異表達(dá)的相關(guān)基因。用westernblot方法驗(yàn)證線粒體復(fù)合體ⅡSdha的蛋白表達(dá)。通過(guò)比色法觀察砷對(duì)SD

3、H的酶活性影響。 采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件,用單因素方差分析(ANOVA),比較各染砷組與對(duì)照組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,以P<0.05表示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著。 結(jié)果:與對(duì)照組比較,4ppm染砷組小鼠腦組織出現(xiàn)明顯的8-OH-dG表達(dá),而對(duì)照組未見(jiàn)8-OH-dG表達(dá)。電鏡結(jié)果顯示,對(duì)照組小鼠腦組織線粒體雙層膜結(jié)構(gòu)完整,嵴清晰可見(jiàn)。染砷組小鼠腦組織線粒體雙層膜結(jié)構(gòu)完整,線粒體腫脹,部分嵴消失或斷裂,線粒體出現(xiàn)空泡變。基因芯片篩選結(jié)果

4、顯示:染砷組小鼠腦組織線粒體呼吸鏈復(fù)合體差異表達(dá)的相關(guān)基因共11條,其中表達(dá)下調(diào)的基因10條,分別為NADH-泛醌還原酶基因(Ndufab1,Ndufb12,andNdufb2),琥珀酸-泛醌還原酶基因(Sdha),泛醌-細(xì)胞色素C還原酶基因(Uqcr),細(xì)胞色素C氧化酶基因(Cox6a2,Cox17),ATP合酶基因(Atp5a1,Atp5g1,Atpif1)。表達(dá)上調(diào)的基因?yàn)镹ADH-泛醌還原酶基因(Ndufs4)。小鼠腦組織線粒體

5、復(fù)合體ⅡSdha的westernblot結(jié)果顯示:Sdha蛋白表達(dá)量隨著染砷劑量的增加其蛋白表達(dá)量明顯減少,尤其在4ppm染砷組最為明顯。在干預(yù)組(?;撬岷途S生素C),線粒體復(fù)合體ⅡSdha蛋白表達(dá)量比4ppm染砷組明顯增多。線粒體復(fù)合體ⅡSdha蛋白表達(dá)量隨著染砷天數(shù)的增多而降低。染砷組小鼠腦組織SDH酶活性低于對(duì)照組,且隨染砷濃度的增高而降低,尤其4ppm染砷組SDH酶活性降低最為明顯(P<0.05)。在?;撬岷途S生素C干預(yù)組,小鼠

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