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文檔簡介
1、該文以Bacillus natto基因組DNA為模板,通過PCR擴增NK的全長基因,并實現了其在蛋白酶缺陷型枯草桿菌中的高效表達.經超濾濃縮、凝膠過濾層析、離子交換層析,純化獲得純度為95﹪、比活性11.2×10<'4>IU/mg的rNK,產率為125mg/L.血小板聚集依賴于其特有的功能性受體GPⅡb/Ⅲa的存在.國內外根據RGD三肽序列已設計了許多GPⅡb/Ⅲa受體阻斷劑,用于抑制血小板的聚集.因此,在獲得重組NK的基礎上,我們運用
2、計算機輔助分子模擬的方法建立了NK的空間結構模型,結合功能信息合理設計新型NK分子,采用基因工程和蛋白質工程方法在NK分子表面非功能的loop區(qū)引入RGD肽,經表達純化后用于生物學性質研究.結果顯示該衍生物在保持野生型NK相同纖溶活性的同時,尚能顯著抑制血小板聚集,具有溶栓與防栓雙重功能.結果顯示,pro肽在體內體外,通過分子內或分子間的方式均能幫助NK分子的折疊與再折疊,作為一種分子內的分子伴侶(intramolecular chap
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