IL-13和乙醇促進人肺成纖維細胞膠原表達.pdf

1、目的：白細胞介素-13(Interleukine-13，IL-13)是調(diào)控肺纖維化的主要TH2細胞因子，IL-13與IL-13受體α1(IL-13Rα1)、IL-4受體α(IL-4Rα)相結(jié)合產(chǎn)生促纖維化作用，IL-13受體α2(IL-13Rα2)以高親和力結(jié)合IL-13并抑制IL-13的促纖維化作用。本實驗檢測乙醇對人肺成纖維細胞(HFL-1)增殖以及HFL-1細胞IL-13受體基因表達的影響，研究乙醇和IL-13對HFL-1細胞Ⅰ、

2、Ⅲ膠原基因(COL1A1、COL3A1 mRNA)的表達以及膠原蛋白合成的影響，從分子水平和蛋白水平探討乙醇對IL-13介導(dǎo)的肺纖維化的作用機制。
　　 方法：⑴臺盼藍染色檢測HFL-1細胞活性。⑵HE染色觀察HFL-1細胞形態(tài)。⑶細胞代謝測定(MTT比色法)檢測乙醇和/或IL-13刺激HFL-1細胞后的增殖：細胞分組：①空白組②IL-13組(10 ng/ml、20 ng/ml和50 ng/ml)③乙醇組(25 mM、50 mM

3、、100 mM、200 mM、400 mM、800 mM、1600 mM)④乙醇(25 mM、50 mM、100 mM、200 mM)和IL-13(10 ng/ml、20 ng/ml和50 ng/ml)混合組。⑷采用實時熒光定量RT-PCR(Real time RT-PCR)分析IL-13(10 ng/ml、20 ng/ml和50 ng/ml)和/或乙醇(25 mM、50 mM、100 mM、200 mM)對HFL-1細胞刺激前后各組I

4、L-4Rα mRNA，IL-13Rα1 mRNA和IL-13Rα2 mRNA以及COL1A1、COL3A1 mRNA表達的影響。⑸ELISA方法檢測IL-13(10 ng/ml、20 ng/ml和50 ng/ml)和/或乙醇(25 mM、50 mM、100 mM、200 mM)對HFL-1細胞刺激前后各組細胞培養(yǎng)液中Ⅰ型膠原蛋白的表達的影響。
　　 結(jié)果：①HFL-1細胞活性良好，低濃度乙醇(<200 mM)對HFL-1細胞無毒

5、性作用。②HE染色觀察HFL-1細胞為長梭形，胞質(zhì)被染成粉紅色，胞核為橢圓形被染成藍色。③低濃度乙醇(<200 mM)不會影響HFL-1細胞的增殖，但與IL-13(10 ng/ml、20 ng/ml和50 ng/ml)共同刺激下對HFL-1細胞的增殖有顯著的促進作用，IL-13(10 ng/ml、20 ng/ml和50 ng/ml)對HFL-1細胞有促增殖作用，且有濃度依賴性。④Real time RT-PCR檢測結(jié)果顯示，低濃度乙醇(

6、50 mM、100 mM、200 mM)刺激HFL-1細胞后IL-13Rα1 mRNA，IL-4Rα mRNA表達都顯著增強，同時IL-13Rα2 mRNA表達顯著減弱。低濃度乙醇(25 mM、50 mM、100 mM、200 mM)刺激HFL-1細胞前后COL1A1 mRNA、COL3A1 mRNA并無表達差異，IL-13(10ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml)刺激HFL-1細胞COL1A1 mRNA、COL3A1 mR

7、NA表達顯著增強，IL-13(10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml)和200 mM乙醇共同刺激HFL-1細胞后比單獨相應(yīng)濃度IL-13刺激后COL1A1 mRNA、COL3A1 mRNA表達顯著增強。⑤ELISA檢測結(jié)果顯示：低濃度乙醇(25 mM、50 mM、100 mM和200 mM)刺激HFL-1細胞前后Ⅰ型膠原蛋白并無表達差異，IL-13(10 ng/ml、20 ng/ml、50ng/m1)和200 mM乙醇共同

8、刺激HFL-1細胞后比單獨相應(yīng)濃度的IL-13刺激后Ⅰ型膠原蛋白表達顯著增強。
　　 結(jié)論：⑴低濃度乙醇不影響HFL-1細胞的增殖，但與IL-13共同刺激下將對HFL-1細胞的增殖有顯著的促進作用。⑵低濃度乙醇刺激HFL-1細胞對IL-13Rα1 mRNA、IL-4Rα mRNA的表達起著上調(diào)作用，下調(diào)IL-13Rα2 mRNA的表達。⑶低濃度乙醇刺激HFL-1細胞后COL1A1 mRNA、COL3A1 mRNA的表達無影響。⑷