IL-13對與人乳腺癌細胞共培養(yǎng)的人乳腺成纖維細胞自噬基因Beclin1和LC3II表達的影響.pdf

1、目的:癌相關成纖維細胞（carcinoma-associated-fibroblasts，CAFs）是一種近來被廣泛關注的基質(zhì)細胞。作為腫瘤基質(zhì)的最主要成分，它通過不斷地向其所處外界環(huán)境分泌大量細胞因子等物質(zhì)，直接或間接作用于其周圍的腫瘤細胞。這不僅促進腫瘤細胞的不斷增殖，而且加速腫瘤細胞的浸潤與轉(zhuǎn)移。有證據(jù)顯示，癌相關成纖維細胞通過高程度自噬行為降解自身大分子并分泌養(yǎng)分于外界環(huán)境中，為其所處微環(huán)境中的癌細胞提供營養(yǎng)。白細胞介素13(I

2、nterlukine13，IL-13)是Th2細胞分泌的多效能細胞因子，它在乳腺腫瘤與乳腺炎都有異常高的表達。近期研究顯示，IL-13參與調(diào)控成纖維細胞亞型細胞的NF-κB(nuclear transcription factorκB)，通路的上游信號，而NF-κB則是參與細胞自噬調(diào)控過程的重要信號分子。本研究通過將人乳腺成纖維細胞與人乳腺癌細胞共培養(yǎng)模擬腫瘤微環(huán)境，力圖探索IL-13在腫瘤微環(huán)境中對人乳腺成纖維細胞的增殖和自噬基因表達

3、的影響。
　　方法:1.細胞培養(yǎng):細胞生長在含10％胎牛血清、105U/L青霉素和105U/L鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中，放入37℃、5％CO2、100％相對濕度的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。2.實驗分組:實驗分為4組，空白組（單獨培養(yǎng)人乳腺成纖維細胞株Hs578Bst）;IL-13組（單獨培養(yǎng)人乳腺成纖維細胞株Hs578Bst并加入終濃度20ng/mL IL-13）;共培養(yǎng)組又稱435組（人乳腺成纖維細胞株Hs578Bst與人乳腺癌細胞株MDA-

4、MB-435共培養(yǎng)）;共刺激組（人乳成纖維細胞株Hs578Bst與人乳腺癌細胞株MDA-MB-435懸掛共培養(yǎng)并加入終濃度20ng/mL IL-13）。3.臺盼藍染色:臺盼藍染色檢測各組Hs578Bst細胞的活性。4.CCK-8法:將105/mL的Hs578Bst細胞接入6孔板，參照分組分別加入終濃度20ng/mL IL-13，或以4∶1的比例將Hs578Bst細胞與MDA-MB-435細胞共培養(yǎng)。培養(yǎng)72h后，CCK-8法測定各組Hs

5、578Bst細胞的增殖。5.免疫細胞化學法:各組細胞培養(yǎng)72h后，免疫細胞化學方法檢測Hs578Bst細胞自噬分子Beclin1及LC3Ⅱ的蛋白表達，IPP6軟件測各組兩種自噬相關蛋白的平均光密度。6.實時定量熒光PCR:各組細胞培養(yǎng)72h后，用實時定量熒光PCR檢測Hs578Bst細胞自噬分子Beclin1和LC3Ⅱ的mRNA的表達。
　　結(jié)果:1.細胞活性實驗結(jié)果顯示，IL-13對Hs578Bst細胞的活細胞百分率無顯著影響。

6、2.細胞增殖實驗結(jié)果顯示，435組分別與空白組或IL-13組比較，435組細胞數(shù)量增加(P＜0.05);共刺激組分別與空白組或IL-13組比較，共刺激組細胞數(shù)量增加(P＜0.05);空白組與IL-13組之間無顯著差異(P＞0.05);435組與共刺激組之間無顯著差異(P＞0.05)。3.免疫組織化學實驗結(jié)果顯示，共刺激組分別與各組比較，Hs578Bst細胞的Beclin1和LC3Ⅱ蛋白表達均顯著上調(diào)(P＜0.05);435組Hs578B

7、st細胞Beclin1和LC3Ⅱ蛋白均表達上調(diào)，分別與空白組或IL-13組比較，差異有顯著性(P＜0.05)。IL-13組與空白組比較，Hs578Bst細胞的Beclin1和LC3Ⅱ蛋白表達均無顯著性差異(P＞0.05)。4.實時定量熒光PCR結(jié)果顯示，共刺激組分別與各組比較，Hs578Bst細胞的Beclin1與LC3Ⅱ的mRNA表達均顯著上調(diào)(P＜0.05)，435組Hs578Bst細胞的Beclin1與LC3Ⅱ的mRNA表達上調(diào)，

8、分別與空白組或IL-13組比較，差異有顯著性(P＜0.05)。IL-13組與空白組比較，Hs578Bst細胞Beclin1和LC3Ⅱ mRNA表達均無顯著性差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論:1.人乳腺癌細胞株MDA-MB-435與人乳腺成纖維細胞株Hs578Bst共培養(yǎng)能促進Hs578Bst細胞的增殖。2.IL-13對人乳腺成纖維細胞株Hs578Bst的增殖無顯著影響。3.IL-13與人乳腺癌細胞株MDA-MB-435具有協(xié)同作用