神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化和凋亡的影響.pdf

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化和凋亡的影響姓名：孫劍瑞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：神經(jīng)外科指導(dǎo)教師：楊波20050501鄭州大學(xué)2005屆碩士研究生畢業(yè)論文(摘要)神經(jīng)生長(zhǎng)因予對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化和凋亡的影響細(xì)胞，密度為5X105個(gè)／m]，接種于培養(yǎng)板中，分組如下：加入堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)作為陽(yáng)性對(duì)照組：實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)液中分別加入不同濃度NGF；基礎(chǔ)培養(yǎng)液，無(wú)添加成分作為空白對(duì)照組。分別于第3、10天用二

2、甲基噻唑二苯基四唑溴鹽(MTT)染色，比色分析法測(cè)定細(xì)胞活力，并計(jì)細(xì)胞球數(shù)；于第5天行流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；于培養(yǎng)第7天，收集培養(yǎng)板中所有細(xì)胞，行NSE、GFAP免疫細(xì)胞化學(xué)染色，計(jì)GFAP，NSE陽(yáng)性細(xì)胞比率；向細(xì)胞中均加入終濃度5％的胎牛血清，待細(xì)胞全部貼壁分化后，收集細(xì)胞，行NSE免疫細(xì)胞化學(xué)染色，計(jì)NSE陽(yáng)性細(xì)胞比率。所有資料均用SPSSl00軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，a=005為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。結(jié)果；I細(xì)胞培養(yǎng)8～10d后細(xì)胞生長(zhǎng)成為數(shù)十

3、到數(shù)百個(gè)細(xì)胞的懸浮球形克隆，免疫細(xì)胞化學(xué)Nesfin鑒定陽(yáng)性。212～18u／ml的DispaseII消化后的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)，可見(jiàn)較多懸浮生長(zhǎng)的球形細(xì)胞克隆形成，免疫細(xì)胞化學(xué)Nestin鑒定陽(yáng)性。3細(xì)胞球數(shù)和MTT測(cè)定統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明：培養(yǎng)3d時(shí)50g／LNGF組增殖較其他各組低，P005，與空白對(duì)照組比較有顯著性差異，P005；2嵋?guī)住?0鵬幾、50p班NGF組與陽(yáng)性對(duì)照組比較有顯著性差異，與空白對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。4隨著NGF濃度的增大

4、，神經(jīng)干細(xì)胞分化的比率也呈增高趨勢(shì)，差異顯著。分化條件下，NSE(十)細(xì)胞比率在5、10、20、50舊LNGF組間無(wú)顯著性差異，2pg／LNGF組NSE()細(xì)胞比率較其他試驗(yàn)組低。5流式細(xì)胞檢測(cè)示細(xì)胞凋亡率在2、5、10Ig／LNGF組間變化不明顯，20、50“g，LNGF組細(xì)胞凋亡率明顯增高。10嵋／LNGF組細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)較其他實(shí)驗(yàn)組高。結(jié)論：1采用機(jī)械法分離人胚腦組織特定區(qū)域(V硝Vz)的細(xì)胞，用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，細(xì)胞生長(zhǎng)狀