“雙固一通”電針法對衰老模型大鼠的治療作用及T細胞免疫機制研究.pdf

1、目的：
　　 本實驗以中醫(yī)“治未病”的思想理論為指導,以皮下注射D-半乳糖建立的衰老模型大鼠為實驗對象,在前期研究的基礎上,進一步觀察與探討“雙固一通”電針法對衰老模型大鼠的治療作用及T細胞免疫機制,為臨床研究提供依據,并促進其在防治衰老領域中的應用。
　　 方法：
　　 清潔級SD健康大鼠雌性40只,5月齡,體重(180±20)g,根據簡單隨機排序法分為每組各10只,即青年對照組、衰老模型組、電針強壯穴組、電針

2、對照組,采用D-半乳糖(D-gal)致亞急性衰老法造成大鼠亞急性衰老模型。電針強壯穴組取“關元”、“后三里”、“百會”;電針對照組取“中極”、“陰陵泉”、“印堂”。兩組電針組均選用HANSLH202H型電針儀,連續(xù)波,頻率2Hz,強度為1mA,通電15min。采用Moris水迷宮實驗比較學習記憶行為能力的變化;采用黃嘌呤氧化酶法檢測血清中SOD活性,用硝酸鹽還原酶法測定血清中MDA含量;手術摘取胸腺與脾臟計算胸腺與脾臟指數(shù)變化;透射電鏡

3、法觀察衰老模型大鼠胸腺細胞超微結構的改變,來觀察“雙固一通”電針法對D-半乳糖誘導的衰老模型大鼠延緩衰老的療效。采用流式細胞儀檢測T細胞亞群CD4+;CD4+CD45R0+;CD8+;CD8+CD45RO+;CD45RA+;CD45RO+;CD45RA+/CD45RO+陽性T細胞表達的變化,探討“雙固一通”電針治療延緩衰老的機制。
　　 結果：
　　 1.Moris水迷宮檢測,與正常對照組相比,衰老模型組大鼠找到平臺的時

4、間延長(P＜0.01);與衰老模型組相比,兩組電針治療組找到平臺的時間縮短(P＜0.05);兩組電針組相比,“雙固一通”電針組找到平臺的時間縮短(P＜0.05).
　　 2.與正常對照組相比,衰老模型組血清中SOD活性明顯降低(P＜0.001),MDA含量明顯升高(P＜0.01);與衰老模型組相比,兩組電針治療組SOD活性均提高(P＜0.01),MDA含量均降低(P＜0.05);兩組電針組之間相比,“雙固一通”電針組SOD活性較

5、電針對照組升高(P＜0.05),MDA含量較電針對照組降低(P＜0.05)。
　　 3.手術摘取脾臟計算脾臟指數(shù)變化
　　 衰老模型組與正常對照組相比,脾臟指數(shù)降低(P＜0.05),胸腺指數(shù)降低(P＜0.05),差異顯著。與衰老模型組相比,兩組電針組脾臟指數(shù)明顯升高(P＜0.05),胸腺指數(shù)明顯升高(P＜0.05),同時“雙固一通”電針組療效優(yōu)于電針對照組(P＜0.05)。
　　 4.透射電鏡法觀察胸腺超微結構<

6、br>　　 與正常對照組相比較,衰老模型組淋巴細胞萎縮退化,形狀不規(guī)則,可見細胞核固縮,核周間隙擴大,核內染色質邊集,大量胸腺細胞出現(xiàn)凋亡或變性壞死,胞漿內細胞器壞死,細胞膜破裂,胞漿外溢,線粒體腫大變性,嵴斷裂或消失。兩組電針組在胸腺細胞凋亡,細胞膜、細胞核及細胞器的破壞程度等方面均輕于衰老模型組,而“雙固一通”電針組在以上組織的破壞程度更是小于電針對照組。
　　 5.采流式細胞儀檢測T細胞亞群細胞陽性表達。
　　

7、①與正常對照組相比,衰老模型組CD4+T細胞表達降低(P＜0.01),而CD4+CD45RO+T細表達升高(P＜0.01),差異明顯;與衰老模型組相比,“雙固一通”電針組(P＜0.01)和電針對照組(P＜0.05)CD4+T細胞表達均升高,“雙固一通”電針組(P＜0.05),和電針對照組(P＜0.05)CD4+CD45RO+T細胞表達均降低,差異明顯;與“雙固一通”電針組相比,電針對照組CD4+T細胞表達降低(P＜0.05),CD8+C

8、D45RO+T細胞表達升高(P＜0.05)。
　　 ②與正常對照組相比,衰老模型大鼠,CD8+T細胞(P＜0.01)及CD8+CD45RO+T細胞(P＜0.05)表達升高;與衰老模型組相比,“雙固一通”電針組CD8+T細胞(P＜0.01)及CD8+CD45RO+T細胞(P＜0.05)表達降低,電針對照組CD8+T細胞表達減少(P＜0.05),但CD8+CD45RO+T細胞表達無明顯差異(P＞0.05);與“雙固一通”電針組相比,

9、電針對照組CD8+T細胞(P＜0.05)及CD8+CD45RO+T細胞(P＜0.05)表達升高。
　　 ③與正常對照組相比,衰老模型組CD45RA+T細胞表達降低(P＜0.01),而CD45RO+T細胞表達升高(P＜0.01),CD45RA+/CD45RO+比值降低(P＜0.05);與衰老模型組相比,“雙固一通”電針組CD45RA+T細胞表達升高(P＜0.05),CD45RO+陽性T細胞表達降低(P＜0.01),CD45RA+/

10、CD45RO+比值升高(P＜0.01);電針對照組CD45RA+T細胞表達升高(P＜0.05),CD45RO+T細胞表達降低(P＜0.05),CD45RA+/CD45RO+比值升高(P＜0.05);與“雙固一通”電針組比較,電針對照組CD45RA+T細胞表達降低(P＜0.05),CD45RO+T細胞表達升高(P＜0.05),CD45RA+/CD45RO+比值降低(P＜0.05)。
　　 結論：
　　 1.“雙固一通”電針

11、法對D-半乳糖所致衰老模型動物學習記憶與空間辨別能力,自由基代謝、免疫相關指數(shù)、胸腺超微形態(tài)結構等具有明顯改善作用,有效延緩機體衰老,療效顯著。
　　 2.“雙固一通”電針法可升高CD4+;CD45RA+T細胞表達及CD45RA+/CD45RO+比值,而降低CD4+CD45RO+;CD8+;CD8+CD45RO+及CD45RO+T細胞表達,對機體的免疫系統(tǒng)及細胞免疫起到了良性調節(jié)作用。
　　 3.“雙固一通”電針法延緩衰