“雙固一通”針法對帕金森病模型大鼠免疫功能調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、帕金森病(Parkinson′s disease，PD)是一種好發(fā)于中老年人常見的緩慢進(jìn)展性神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，發(fā)病率在神經(jīng)變性疾病中處于第二位，而且發(fā)病率隨著年齡增長而逐漸增高，65歲以上的老年人中，發(fā)病率占到1％～3％。當(dāng)紋狀體內(nèi)多巴胺水平減少 70％～80％，中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元變性超過 50％時(shí)，導(dǎo)致錐體外系運(yùn)動(dòng)功能障礙，如出現(xiàn)靜止性震顫、強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)過緩和姿勢不穩(wěn)等表現(xiàn)。 目的：本課題擬探討“雙固一通”針法對PD模型大鼠

2、免疫功能調(diào)節(jié)的作用機(jī)制。本課題在前期工作的基礎(chǔ)上，建立早中期PD大鼠模型，采用免疫學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，從細(xì)胞免疫、體液免疫、免疫調(diào)控等方面入手，在細(xì)胞和分子水平闡明針刺治療對帕金森病免疫功能的調(diào)節(jié)作用，從而為揭示針刺治療帕金森病的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為臨床治療提供指導(dǎo)作用。 方法： 1．建立早中期偏側(cè)PD大鼠模型：SD大鼠80只，隨機(jī)分為4組：正常對照組，假手術(shù)組，模型組，“雙固一通”組。在鼠腦立體定位儀上，將6

3、-OH DA(10μg/5μL)注入大鼠一側(cè)紋狀體尾殼核(CPU)，1 周后以阿樸嗎啡(apomorphine)腹腔注射(0.5mg/kg體重)誘發(fā)旋轉(zhuǎn)行為，40min內(nèi)平均轉(zhuǎn)速超過7r/min者為造模成功。 2.“雙固一通”針刺治療方法：取關(guān)元、足三里、太沖、風(fēng)府，30 號毫針，接G6805 電針治療儀，采用連續(xù)波，頻率為 120次/分，每天1次，每次30分鐘，連續(xù)治療30天后取材。4組動(dòng)物同步。 3．“雙固一通”針法

4、對早中期PD模型大鼠中腦黑質(zhì)區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)及含量的影響，采用蓖麻凝集素標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞；免疫組織化學(xué)染色。 4．“雙固一通”針法對早中期PD模型大鼠中腦黑質(zhì)HLA-DR表達(dá)的影響；運(yùn)用PCR和western blot技術(shù)測定HLA-DR表達(dá)水平。 5．“雙固一通”針法對早中期PD模型大鼠細(xì)胞因子IFN-γ受體以及TNF-α受體的影響；運(yùn)用抗細(xì)胞因子受體單克隆抗體測定法測定IFN-γ受體以及TNF-α受體含量。 6

5、．“雙固一通”針法對早中期PD模型大鼠IL-1活性的影響，采用免疫組化方法。 7．“雙固一通”針法對早中期PD模型大鼠黑質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響，TH 細(xì)胞流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡和PCR方法檢測Bax和Bcl-2基因表達(dá)。 結(jié)果： 1．模型組損毀側(cè)黑質(zhì)致密部神經(jīng)元總數(shù)、TH陽性神經(jīng)元數(shù)量及紋狀體TH陽性神經(jīng)纖維數(shù)量顯著低于正常組和假手術(shù)組(P<0.01)，“雙固一通”組與模型組比較各相應(yīng)指標(biāo)數(shù)值均顯著增加(P<0.01)

6、；正常對照組組和假手術(shù)組幾乎未見 RCA 陽性小膠質(zhì)細(xì)胞，而“雙固一通”組的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量與同時(shí)間段的模型組小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量相比均有降低(P<0.05)。 2．PCR方法檢測HLA-DRA，HLA-DRB1，4在模型組表達(dá)明顯高于正常對照組，假手術(shù)組和“雙固一通”組，用電針治療后，HLA-DRA，HLA-DRB1，4明顯降低，而HLA-DRB3，5 卻無此變化；HLA-DRA，HLA-DRB1，3，5 蛋白在模型組表達(dá)明顯高于正常

7、對照組組，假手術(shù)組和“雙固一通”組。用電針治療后，明顯降低，與PCR結(jié)果有點(diǎn)不同的是只有HLA-DRB4無此變化。 3．與帕金森模型組，正常對照組和假手術(shù)組相比較，“雙固一通”組大鼠血清中TNF-αR和IFN-γR 含量明顯降低(P<0.01)。 4．帕金森模型組大鼠IL-1β的表達(dá)明顯高于“雙固一通”治療組、正常對照組和假手術(shù)組(P<0.05)，電針治療后IL-1β的表達(dá)明顯低于模型組。 5．模型組黑質(zhì)凋亡細(xì)胞

8、比率最高，與其它組比較均有極顯著性差異性(P<0.01)?！半p固一通”組黑質(zhì)細(xì)胞凋亡率雖然低于模型組，但仍高于正常組和假手術(shù)組，有顯著性差異性(P<0.01)。 6．Bax mRNA在模型組的黑質(zhì)、紋狀體內(nèi)表達(dá)均有所下降，尤其在黑質(zhì)內(nèi)的表達(dá)與對照組比有顯著性差異(P<0.05)，“雙固一通”組Bax mRNA的表達(dá)增高，與模型組相比(P<0.05)；相對于Bax，模型組的Bcl-2 mRNA 只在黑質(zhì)中表達(dá)顯著低于對照組(P<0