骨橋蛋白激活NF-κB信號(hào)通路調(diào)控OA滑膜細(xì)胞MMP13表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：骨性關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）是一種常見的慢性關(guān)節(jié)病。其發(fā)病率隨著年齡增長(zhǎng)逐漸增加。其病理特征為原發(fā)或繼發(fā)性的關(guān)節(jié)軟骨病變，具體表現(xiàn)為關(guān)節(jié)軟骨膠原蛋白降解、蛋白多糖降解和關(guān)節(jié)軟骨結(jié)構(gòu)破壞，同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致一定程度的滑膜炎癥。WHO數(shù)據(jù)顯示，10%男性及18女性%以及65%年齡超過60歲的人都患有不同程度的骨關(guān)節(jié)炎。雖然 OA的病因是比較復(fù)雜的（遺傳，體質(zhì)，生物力學(xué)因素），但我們對(duì) OA的發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)正不斷加深。骨橋

2、蛋白（Osteopontin，OPN）是一種廣泛分布于人體組織中，具有多種功能的磷酸化蛋白。OPN可由多種細(xì)胞分泌，包括巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、上皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、滑膜細(xì)胞以及軟骨細(xì)胞。在骨組織中，OPN可調(diào)節(jié)細(xì)胞基質(zhì)和細(xì)胞間的活動(dòng)，參與骨折修復(fù)中軟骨向骨的轉(zhuǎn)化以及破骨細(xì)胞對(duì)骨基質(zhì)的附著。骨橋蛋白（Osteopontin，OPN）與骨關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重程度及疾病的發(fā)生進(jìn)展密切相關(guān)，但OPN在OA發(fā)病機(jī)制中的作用尚未明確。本研究目的旨在探討骨

3、橋蛋白在膝骨關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis，OA）中的調(diào)控作用以及涉及的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　方法：
　　1.選取15名OA患者其中男性7例，女性8例，平均年齡61.2±8.5歲。選取同期正常對(duì)照組15例，為不伴有骨關(guān)節(jié)炎的半月板損傷或韌帶損傷。對(duì)照組男性9例，女性6例，平均年齡42.4±7.8歲。II型膠原酶一步消化法處理OA滑膜組織，分離培養(yǎng)OA軟骨細(xì)胞并傳代，取第一代OA軟骨細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)。
　　2.根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)

4、道siRNA序列，合成OPN-siRNA，與OPN組作為實(shí)驗(yàn)組，無(wú)意義序列Con-siRNA為陰性對(duì)照組，將兩組序列進(jìn)行脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，采用Western Blotting檢測(cè)NF-κB(nuclear factor-KappaB)p65、p-NF-κB p65的蛋白水平，將得到的Western blot圖片，用IPP軟件處理，得出灰密度值，進(jìn)行目的蛋白NF-κB/p-NF-κB的均一化處理和內(nèi)參蛋白β-actin的均一化處理，將濃度組得到

5、的NF-κB/p-NF-κB p65的均一化結(jié)果除以β-actin的結(jié)果，得到各組的相對(duì)定量值。
　　3.以轉(zhuǎn)染Con-siRNA的OA滑膜細(xì)胞為對(duì)照組，轉(zhuǎn)染OPN-siRNA、OPN、PDTC及PDTC聯(lián)合OPN處理細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組。用Western blot檢測(cè)MMP13表達(dá)情況。用上述方法得到各組相對(duì)定量值。
　　結(jié)果：相比對(duì)照組，經(jīng) OPN干預(yù)后，P65含量及 P65磷酸化顯著增加(P=0.0025，P=0.0019)。

6、然而，OPN-siRNA處理后的 P65含量及 P65磷酸化相比對(duì)照組顯著降低(P=0.0024，P=0.0176)。OPN可顯著提高M(jìn)MP13蛋白含量（P=0.0075），而OPN-siRNA可顯著降低蛋白含量（P=0.0021），NF-κB抑制劑（PDTC）可明顯拮抗OPN對(duì)MMP13蛋白的調(diào)控(P=0.0231)。
　　結(jié)論：OPN可促進(jìn)OA滑膜細(xì)胞NF-κB p65、p-NF-κB p65的蛋白表達(dá)，并通過激活NF-κB信