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文檔簡介
1、目的:熊果酸(UA)是存在于天然植物和藥物中的一種三萜類化合物,具有廣泛的生物學效應。許多學者研究了熊果酸的抗腫瘤、抗炎和免疫調(diào)節(jié)功效。但到目前為止熊果酸對T細胞功能的影響尚不明確。T細胞是淋巴細胞的主要組分,是免疫識別、應答以及調(diào)控的主要細胞,在免疫系統(tǒng)處于主導地位,T細胞活化在正常的免疫應答和病理性免疫應答中起著關鍵性作用。 類風濕關節(jié)炎(RA)是一種以多關節(jié)滑膜慢性炎癥導致關節(jié)軟骨進行性破壞,大量淋巴細胞、巨噬細胞、漿細胞
2、浸潤為特征的一種常見自身免疫性疾病。RA的病理和病因包括了自身抗原的異常呈遞和自身反應性T細胞的激活。一般認為RA的慢性炎癥是由抗原誘導T細胞活化,促使T細胞向滑膜浸潤引起炎癥反應,從而進一步導致滑膜增生和血管翳產(chǎn)生及軟骨、骨的吸收。RA伴隨著T細胞過度增殖,關節(jié)滑膜液淋巴細胞活化標志CD69、CD25、CD71、HLA-DR表達增高,血清中Th1/Th2細胞分泌的細胞因子存在明顯失衡。雖然,RA的發(fā)病機制至今不明,但是研究淋巴細胞活化
3、及其信號傳遞異常,改變細胞信號異常傳遞,平衡促炎性細胞因子和抗炎性細胞因子的分泌,進而阻斷淋巴細胞的過度激活,將為臨床診斷和治療RA提供新的思路。因此,以小鼠體外T淋巴細胞模型為研究對象,尋找具有免疫調(diào)節(jié)作用的中藥成分,為治療類風濕關節(jié)炎等自身免疫性疾病篩選有效中藥,具有一定的實際意義。 CD69,CD25,CD71在T細胞中的表達均與T細胞增殖相關。IL-2、IFN-γ和IL-4分別是Th1和Th2反應的代表,檢測IL-2、I
4、FN-γ和IL-4,可反應Th1/Th2平衡狀況。NF-κB在炎癥和自身免疫性疾病的病理機制中發(fā)揮重要的免疫學作用,從而導致類風濕性關節(jié)炎等疾病的發(fā)展。NF-κB活化的抑制劑可能有效治療自身免疫性和炎性疾病。 中藥復方痹腫消湯由白花蛇舌草、藤梨根、絡石藤等組成,是治療類風濕性關節(jié)炎的有效方劑,而熊果酸是其中多種中藥的主要活性成分。先前的研究證明熊果酸具有明顯的抗炎作用,能改善膠原誘導的關節(jié)炎小鼠的癥狀,但機制并不清楚。本研究探討
5、了熊果酸體外對T淋巴細胞增殖、激活、細胞因子表達以及NF-κB信號通路的影響,為熊果酸對類風濕性關節(jié)炎等自身免疫性疾病和炎癥性疾病的臨床治療提供實驗依據(jù)。 方法:為了探討熊果酸的免疫調(diào)節(jié)作用,研究了體外熊果酸對T淋巴細胞增殖、激活,細胞因子表達以及NF-κB信號通路的影響。首先,采用MTT法檢測熊果酸對ConA或PMA加Ion誘導的小鼠淋巴細胞增殖的影響;其次,采用流式細胞術檢測熊果酸對PMA誘導的T細胞表面分子CD69、CD2
6、5、CD71表達的影響;第三,采用RT-PCR方法驗證熊果酸對PMA加Ion誘導的T淋巴細胞Th1/Th2細胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4mRNA表達的影響;第四,采用ELISA法測定熊果酸對PMA加Ion誘導的T淋巴細胞分泌IL-2水平的影響。第五,采用Wersten blot方法檢測熊果酸對PMA激活T淋巴細胞IκB-α磷酸化和NF-κB P65入核的影響。 結(jié)果: (1)MTT比色法結(jié)果顯示熊果酸(5-30μ
7、M/L)能劑量依賴性地抑制ConA或PMA加Ion誘導的小鼠淋巴細胞增殖。 (2)流式細胞術檢測結(jié)果顯示熊果酸(10-30μM/L)能劑量依賴性地減少PMA激活后T細胞CD3+CD69+、CD3+CD25+、CD3+CD71+陽性率。 (3)RT-PCR檢測結(jié)果顯示熊果酸(5-30μM/L)能劑量依賴地降低PMA加Ion誘導的T細胞IL-2和IFN-γ(Th1)、IL-4(Th2)mRNA表達。 (4)ELISA
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