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文檔簡介
1、牛泡沫病毒(Bovine Foamy Virus)屬反轉錄病毒科泡沫病毒亞科泡沫病毒屬,在體外雖可使細胞發(fā)生強烈病變,在體內卻不表現任何病癥。該病毒基因組中存在兩類啟動子,其中LTR啟動結構基因的表達,內部啟動子IP啟動病毒輔助蛋白的表達,基因轉錄需要這兩個啟動子的協同作用。反式激活因子BTas可上調兩類啟動子的活性。 本實驗室前期研究表明,BTas通過與其在啟動子上的應答元件相結合實現其對啟動子的激活。同時我們也發(fā)現,當LTR
2、上兩個TRE區(qū)域同時缺失時,雖然BTas對其激活明顯下降,但與對照組相比仍有激活作用。序列分析結果表明,殘存序列中存在一個NF-kB因子的潛在結合位點,因此我們推測BTas可以通過NF-kB信號通路激活BFV LTR。 本文對BTas與NF-kB信號通路關系進行研究。發(fā)現BTas能夠特異性激活只含有kB結合序列的報告基因,免疫熒光定位分析顯示BTas能夠導致p65-NF-kB因子的核轉位,證明BTas激活了NF-kB信號通路。進
3、一步對其機制進行探索,發(fā)現BTas可以誘導NF-kB抑制蛋白IkBa的磷酸化,該蛋白的磷酸化位點突變體以及IKK激酶突變體均能夠有效的抑制BTas對kB報告基因的激活作用,表明BTas的激活作用需要IKK引發(fā)的磷酸化作用。利用IKK上游激酶的失活突變體,我們證明BTas對NF-kB的激活作用與TRAF6相關。此外,我們證明病毒感染也能激活只含有kB結合序列的報告基因。以上實驗結果證明BTas確實可通過經典途徑,活化IKK、促進IkBa的
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