Ang-(1-7)對AngⅡ激活人單核-巨噬細(xì)胞NF-κB通路及MMP-9表達(dá)的影響.pdf

1、目的：1．探討AngⅡ激活NF-κB通路誘導(dǎo)人單核/巨噬細(xì)胞(THP-1細(xì)胞)MMP-9表達(dá)的機(jī)制。 2．探討Ang-(1-7)對AngⅡ誘導(dǎo)人單核/巨噬細(xì)胞(THP-1細(xì)胞)MMP-9表達(dá)的影響及其機(jī)制的初步探討。 方法： 1．細(xì)胞培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化：THP-1細(xì)胞用10％的FCS-1640培養(yǎng)，置于37℃、5％CO2孵育箱中靜止培養(yǎng)。每天傳1-2代。與0.1μmol/L佛波酯(PMA)共孵育48 h，誘導(dǎo)THP-

2、1單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞。 2．根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃閮刹糠?，?shí)驗(yàn)分組如下： 第一部分：①PMA組，即對照組②PMA+AngⅡ組(10-7mol/L，1h)③PMA+AngⅡ+PDTC組(10μmol/L，0.5 h)④PMA+PDTC組。 第二部分：①PMA組，即對照組②Ang-(1-7)組③AngⅡ組④Ang-(1-7)+AngⅡ組⑤A-799+Ang-(1-7)+AngⅡ組。其中第④組Ang-(1-7)+AngⅡ

3、組根據(jù)Ang-(1-7)的濃度又分為10-8mol/LAng-(1-7)+AngⅡ組、10-7mol/LAng-(1-7)+AngⅡ組、10-6mol/LAng-(1-7)+AngⅡ組、10-5mol/L Ang-(1-7)+AngⅡ組4個濃度劑量組。 3．方法 用Western-Blotting蛋白印記技術(shù)分別檢測THP-1細(xì)胞磷酸化NF-κB p65及MMP-9表達(dá)的變化，用RT-PCR檢測MMP-9mRNA的表達(dá)變

4、化。 結(jié)果： 1．THP-1細(xì)胞PMA誘導(dǎo)前后形態(tài)學(xué)變化 THP-1細(xì)胞誘導(dǎo)分化前，細(xì)胞呈圓形，懸浮生長；0.1μmol/L PMA處理48 h后，細(xì)胞由懸浮生長變?yōu)橘N壁生長，變形或伸出偽足，成巨噬細(xì)胞狀。 2．AngⅡ及NF-κB抑制劑PDTC作用THP-1巨噬細(xì)胞后磷酸化NF-κB p65及MMP-9表達(dá)的變化 AngⅡ組與對照組相比，AngⅡ誘導(dǎo)THP-1巨噬細(xì)胞磷酸化NF-κB p65增加

5、(1.02±0.10，P＜0.05)，MMP-9蛋白量也增加(1.06±0.11，P＜0.05)，MMP-9mRNA表達(dá)上調(diào)(1.22±0.08，P＜0.05)；PMA+AngⅡ+PDTC組與AngⅡ組比較，NF-κB抑制劑PDTC顯著抑制了磷酸化NF-κB p65(0.99±0.12，P＜0.01)及MMP-9(1.04±0.14，P＜0.01)的表達(dá)，MMP-9mRNA表達(dá)亦下調(diào)(0.90±0.06，P＜0.01)。而PMA+Ang

6、Ⅱ+PDTC組與對照組相比，磷酸化NF-κB p65表達(dá)差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，MMP-9及MMP-9mRNA仍有一定程度表達(dá)(P＜0.01)。 3．AngⅡ、Ang-(1-7)及A-799干預(yù)THP-1巨噬細(xì)胞后磷酸化NF-κB p65及MMP-9表達(dá)的變化 與對照組相比，AngⅡ誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞磷酸化NF-κB p65(1.04±0.05，P＜0.05)及MMP-9(1.04±0.21，P＜0.01

7、)表達(dá)增加，前者對照組為0.98±0.07，后者為0.97±0.07，MMP-9mRNA(0.86±0.81)較對照組(0.70±0.06)表達(dá)也增加(P＜0.01)。10-6mol/L Ang-(1-7)作用于AngⅡ干預(yù)后的THP-1巨噬細(xì)胞，可抑制磷酸化NF-κBp65(1.00±0.09，P＜0.01)及MMP-9(0.97±0.18，P＜0.01)的表達(dá)，MMP-9mRNA表達(dá)減弱(0.94±0.07，P＜0.01)。加入An

8、g-(1-7)受體拮抗劑A-799后，Ang-(1-7)對磷酸化NF-κB p65(1.04±0.04)、MMP-9(1.03±0.17)及MMP-9mRNA(1.29±0.12)抑制作用明顯減低(P＜0.01)。10-8mol/LAng-(1-7)+AngⅡ組、10-7mol/LAng-(1-7)+AngⅡ組、10-6mol/L Ang-(1-7)+AngⅡ組、10-5mol/LAng-(1-7)+AngⅡ組4組MMP-9蛋白分別表達(dá)

9、為1.01±0.17、0.99±0.15、0.97±0.18及0.96±0.30，MMP-9mRNA分別表達(dá)為1.22±0.10、1.12±0.08、0.9±0.07及0.91±0.05，Ang-(1-7)呈濃度依賴性地抑制AngⅡ誘導(dǎo)THP-1巨噬細(xì)胞表達(dá)的MMP-9(P＜0.01)。 結(jié)論： 1．首次證明AngⅡ通過激活NF-κB誘導(dǎo)THP-1巨噬細(xì)胞表達(dá)MMP-9。 2．NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是AngⅡ誘導(dǎo)