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文檔簡介
1、殺菌/通透性增加蛋白(bactericidal/permeadbility-increasing protein,BPI),簡稱殺菌蛋白,是哺乳動物白細胞中存在的一種堿性蛋白,它能與革蘭氏陰性菌脂多糖(LPS)結合,具有中和內毒素和殺滅細菌的作用,在革蘭氏陰性菌感染的治療上有良好的發(fā)展前景.BPI全長約456個氨基酸,其氨基端約200個氨基酸(BPI<,23>)具有完整蛋白的全部生物活性.為獲得重組人BPI(rhBPI)在CHO細胞中的
2、高水平表達,構建出租種以二氫葉酸還原酶基因(dhfr)為篩選標記的真核表達質粒.將這些質粒分別轉染CHO(dhfr)細胞,經過氨甲喋(MTX)加壓篩選,獲得多株穩(wěn)定表達rhBPI的細胞株,表達量最高可達4μg/ml.比較發(fā)現(xiàn),含EF1-α啟動子的質粒與含CMV啟動子的質粒表達效率相似;dhfr的弱化有利于rhBPI的表達.對rhBPI初步純化后進行殺菌實驗.結果表明重組蛋白具有與天然蛋白類似的殺菌活性.用PCR方法獲得hBPI<,23>
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