克隆牛Xist基因DNA甲基化及表達(dá)分析.pdf

1、動(dòng)物克隆的效率非常低可能是由于供體核重編程的不徹底或不適當(dāng)造成的。雌性動(dòng)物個(gè)體有兩條X染色體，為了達(dá)到劑量平衡必須要失活其中的一條，在這一過程中，涉及復(fù)雜的表觀修飾的變化。Xist(X inactivation-specific transcript)基因是X染色體失活啟始的一個(gè)關(guān)鍵基因，沒有它的表達(dá)，X染色體失活就不能正常啟始。DNA甲基化是基因組中的一種重要的表觀修飾，能調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄活性，很多研究已經(jīng)提出哺乳動(dòng)物無活性的X染色體的

2、Xist基因全甲基化，而失活的全不甲基化，因此，Xist基因的活性與DNA甲基化非常相關(guān)。 我們這一研究的目的是檢測在圍產(chǎn)期死亡克隆牛和出生后死亡的克隆牛中Xist基因的DNA甲基化是否存在某些差異，如果有，這種差異是否影響其對(duì)應(yīng)Xist基因的轉(zhuǎn)錄。通過預(yù)測，在靠近Xist基因啟動(dòng)子的區(qū)域找到了唯一一個(gè)CpG島。在該研究中，我們所使用的樣品是正常牛和克隆牛的心、肝、脾、肺和腎五種組織。依據(jù)我們的試驗(yàn)結(jié)果，從不同牛分組的Xist基

3、因CpG島平均的甲基化水平來看，無論是圍產(chǎn)期死亡克隆牛，還是出生后死亡克隆牛都比正常對(duì)照牛的低。而且出生后死亡克隆牛的比圍產(chǎn)期死亡克隆牛的還低。除此之外，我們還檢測了兩頭雄性正常牛Xist基因的甲基化水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在雄性正常牛的五種組織中，Xist基因CpG島基本都處于高甲基化狀態(tài)(平均水平高于90％)。我們用熒光定量-反轉(zhuǎn)錄PCR的方法來檢測Xist基因的轉(zhuǎn)錄水平，然而，意外的是，從平均水平來看，Xist基因DNA甲基化程度高的樣品

4、的Xist轉(zhuǎn)錄水平也高。這有可能是因?yàn)镈NA甲基化在此階段不能調(diào)節(jié)Xist的轉(zhuǎn)錄，或者DNA甲基化程度的降低還不足以使Xist的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生改變，也有可能是因?yàn)樵谶@個(gè)階段DNA甲基化外的其他表觀修飾在調(diào)控Xist基因的轉(zhuǎn)錄水平上起更人作用，還有可能DNA甲基化主要用來預(yù)防Xist基因的意外轉(zhuǎn)錄，其具體作用還有待深入研究。另外，通過檢測，Xist基因在雄性正常牛和克隆牛五種組織中幾乎不轉(zhuǎn)錄，因此Xist基因在雄性正常牛和克隆牛的各組織中是