天山雪蓮細胞培養(yǎng)物體外抗骨質(zhì)疏松作用研究.pdf

1、骨質(zhì)疏松癥現(xiàn)已成為全球性的公共健康問題。成骨細胞介導骨形成和破骨細胞介導骨吸收，二者動態(tài)平衡被破壞是引發(fā)骨質(zhì)疏松的內(nèi)在原因。天山雪蓮（Saussureainvolucrata Kar.et Kir，S.involucrata）是我國稀有的傳統(tǒng)名貴藥材，具有補腎活血，強筋骨，溫腎助陽等功效。雪蓮培養(yǎng)物是采用現(xiàn)代生物技術而獲得的愈傷組織團塊或細胞，其藥理及功效研究是當今天山雪蓮研究及開發(fā)的熱點。本論文研究是以人成骨細胞MG-63為對象，探究

2、天山雪蓮細胞培養(yǎng)物對成骨細胞增殖、發(fā)育的影響及作用機制，以小鼠巨噬細胞RAW264.7作為破骨前體細胞，探討其對破骨細胞形成的影響以及對成熟破骨細胞的作用。
　　RAW264.7細胞在核因子-κB受體活化因子配體（RANKL）誘導下分化為破骨細胞。雪蓮培養(yǎng)物的加入可抑制破骨細胞的形成，并且劑量依賴性地降低抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）活性。對已形成的破骨細胞，乳酸脫氫酶(LDH)活性檢測和Annexin V-PI雙染流式細胞術結果

3、一致，雪蓮培養(yǎng)物可破壞破骨細胞細胞膜，增加胞外LDH酶活，誘導破骨細胞凋亡。RT-PCR結果進一步說明，天山雪蓮細胞培養(yǎng)物通過下調(diào)TRAP和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9) mRNA表達抑制破骨細胞骨吸收功能。
　　以MG-63細胞為研究對象，MTT結果表明，黃酮濃度為31.25μg/mL和62.5μg/mL的天山雪蓮細胞培養(yǎng)物對成骨細胞無細胞毒性，125μg/mL濃度下有細胞毒性。天山雪蓮細胞培養(yǎng)物可顯著提高堿性磷酸酶(ALP)活性

4、從而促進其早期分化;天山雪蓮細胞培養(yǎng)物還可提高膠原蛋白中的4．羥脯氨酸含量，并促進礦化結節(jié)形成，從而促進成骨細胞礦化;同時，并上調(diào)OPG/RANKL表達比值，從而影響骨形成活性。以p38特異性抑制劑SB203580干預成骨細胞，結果表明SB203580顯著抑制天山雪蓮細胞培養(yǎng)物對成骨細胞增殖、ALP活性、礦化結節(jié)形成的促進作用以及對膠原蛋白積累量的提高作用;并抑制天山雪蓮細胞培養(yǎng)物對成骨細胞OPG/RANKL表達的上調(diào)，說明天山雪蓮細胞