細胞培養(yǎng)技術(shù)

1、細胞培養(yǎng)技術(shù)（一）一.細胞培養(yǎng)的基本原理二.細胞培養(yǎng)的基本設(shè)備與用品三.細胞培養(yǎng)用品的清洗與消毒滅菌清洗1.常用玻璃器皿清洗2.橡膠制品的清洗3.G6除菌濾器的清洗4.正壓除菌濾器的清洗5.塑料制品的清洗6.清洗液的配制消毒滅菌1.濕熱消毒2.干熱消毒3.紫外線消毒4.濾過消毒5.消毒劑6.塑料器皿消毒7.電離輻射消毒四.細胞培養(yǎng)用液的配制與除菌1.蒸餾水的制備2.平衡鹽溶液(balancedsaltsolution，BSS)的配制3.

2、天然培養(yǎng)基4.合成培養(yǎng)基5.血清細胞培養(yǎng)基6.無血清細胞培養(yǎng)基7.消化液8.pH調(diào)整液9.200毫摩爾／升L－谷氨酰胺10.抗菌素液11.細胞用液的分裝方法和要求一.細胞培養(yǎng)的基本原理細胞培養(yǎng)是用酶消化法將組織碎塊分離成單個細胞，用培養(yǎng)基制成細胞懸液，在體外適宜條件下，使細胞生長繁殖，并保留其一定的結(jié)構(gòu)和功能特性。細胞培養(yǎng)與組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)主要不同點在于原始培養(yǎng)的對象不同。細胞培養(yǎng)使用的是單個細胞懸液，組織培養(yǎng)使用的是組織塊(05～1

3、立方毫米)或薄片(厚02毫米)，而器官培養(yǎng)使用的是器官原基或器官的一部分或整個器官。在組織培養(yǎng)中，細胞自組織塊周圍移出并生長，細胞在生長過程中總有移動(運動)或其它變動，這樣就使被培養(yǎng)的組織難以長期維持其原有的結(jié)構(gòu)和功能。培養(yǎng)時間越長，發(fā)生變化的可能性越大，結(jié)果常使單一類型的細胞保存下來，最終成了細胞培養(yǎng)。在細胞培養(yǎng)中，細胞生命活動和體內(nèi)細胞一樣，仍然是相互依存的，呈現(xiàn)一定的組織特異性，所以組織培養(yǎng)和細胞培養(yǎng)實際上無嚴格區(qū)別。4.雜用品

4、金屬飯盒、試管架、各種規(guī)格膠塞、記號筆、搪瓷盤、吸頭(吸取液體的膠帽)、酒精燈、酒精、碘酒棉球瓶、火柴等。組織培養(yǎng)中使用最多的是吸管、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿及各種瓶塞。實驗者手中應(yīng)有三套器材，瓶塞數(shù)要大于瓶數(shù)，才能保證實驗中的循環(huán)使用。三.細胞培養(yǎng)用品的清洗與消毒滅菌(1)清洗1.常用玻璃器皿清洗◇清洗要領(lǐng)浸泡初次使用的玻璃器皿呈堿性，表面常附有灰塵和一些對細胞有毒的物質(zhì)，如鋁和砷等。空氣濕度高時，玻璃器皿表面又易長霉。使用前，新器皿浸泡在5％

5、稀鹽酸中過夜，以中和玻璃表面的堿性物質(zhì)并去除霉斑；然后經(jīng)簡單刷洗，流水沖洗(逐片進行)，蒸餾水浸泡，干燥備用。新玻片處理后，短時間不用時，需將它投入95％的酒精中保存，以防玻片長霉。培養(yǎng)后的玻璃器皿應(yīng)立即投入清水中浸泡，器皿中殘留的細胞、蛋白質(zhì)一旦干涸，即固著于玻璃表面，極難脫落。刷洗用過的玻璃器材經(jīng)自來水沖洗后，浸入水中煮沸，然后將適量洗滌劑(洗潔精或洗衣粉)投入沸水中繼續(xù)煮沸10分鐘，趁熱刷洗器皿內(nèi)外，刷洗后浸入清水中進行沖洗。酸泡

6、刷洗好的玻璃器材干燥后置清潔液中浸泡24小時，清潔液的強氧化作用可清除刷洗不掉的極微量雜質(zhì)?！笄逑床襟E玻璃器材煮沸10分鐘→刷洗→流水振蕩沖洗1520遍→50℃烤干→清潔液浸泡24小時→流水振蕩后沖洗1520遍→漓水→蒸餾水浸泡2次(每次24小時)→50℃烤干，待包裝。◇清洗注意事項和要求①使用后的實驗器材應(yīng)立即投入清水中。②浸泡、煮沸、酸泡的器皿內(nèi)要充滿液體，不得有氣泡。③刷洗、酸泡后的器材要用流水振蕩沖洗，不得殘留洗滌劑、清潔液。方