來(lái)氟米特對(duì)糖尿病大鼠早期腎臟損害的保護(hù)作用研究.pdf

1、[目的] 通過(guò)對(duì)鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)誘導(dǎo)的糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)大鼠模型，給予來(lái)氟米特(Leflunomide，LEF)干預(yù)治療，觀察LEF對(duì)DM大鼠腎組織單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)及其上游核因子-κB(NF-K B)表達(dá)和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的影響，探討其對(duì)糖尿病大鼠早期腎臟損害的保護(hù)作用及機(jī)制，為臨床使用LEF防治DN提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。 [方法] 選

2、擇健康同齡雄性SD大鼠44只，體重200±20g，隨機(jī)取32只按65mg·kg·d-1腹腔一次性注射STZ溶液造模(待72小時(shí)后測(cè)尾尖血糖≥16.7mmol/L，認(rèn)為DM大鼠造模成功，血糖不達(dá)標(biāo)的5只大鼠剔除實(shí)驗(yàn))，將DM大鼠隨機(jī)分為糖尿病組(DM組，14R)和LEF治療組(DM+LEF組，13只)。其余12只大鼠作為正常對(duì)照組(NC組)。DM+LEF～給予LEF10mg·kg-1·d-1(以1％羧甲基纖維素鈉溶液(CMC)為懸浮劑懸浮

3、)灌胃，其余兩組給予等量CMC灌胃。實(shí)驗(yàn)期間，所有大鼠自由進(jìn)食和飲水，均不給胰島素及其它降糖藥物治療，觀察一般情況。分別于DM成模后4周、8周各組隨機(jī)處死6只，檢測(cè)大鼠體重(BW)、腎重(KW)、血糖(BG)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿肌酐(Ucr)、尿微量白蛋白(MAU)，并計(jì)算腎臟肥大指數(shù)(腎重KW/體重BW)、肌酐清除率(Ccr)、24小時(shí)尿微量白蛋白排泄率(UAER)。光鏡和電鏡觀察腎臟病理組織學(xué)改變；免疫組化檢測(cè)

4、腎臟ED-l標(biāo)記的單核巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)情況，免疫組化檢～JMCP一1、NF-K B在腎臟的表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR的方法檢測(cè)腎組織中單核細(xì)胞趨化蛋白一1(MCP-1)的mRNA的表達(dá)；并與腎損害程度作相關(guān)性分析。 [結(jié)果] 結(jié)果一般指標(biāo)：DM組、DM+LEF組大鼠出現(xiàn)消瘦，多飲、多食、多尿，兩組并無(wú)差異，而NC組則無(wú)上述情況出現(xiàn)；DM組大鼠隨著病程的延長(zhǎng)，BG、KW/BW、BUN、Ccr和UAER均上升，體重下降明顯

5、，與NC組比較有顯著差異(P<0.05)。而DM+LEF組，其8周時(shí)BUN明顯低于DM組(P<0.01)，BW高于DM組，而KW/BW、Ccr、UAER則于各時(shí)段均低于DM組(P<0.01或P<0.05)。病理組織學(xué)觀察：DM組腎小球系膜區(qū)相對(duì)面積和腎小球基底膜厚度較NC組顯著增加(P<0.01)，DM+LEF組腎小球系膜區(qū)相對(duì)面積和腎小球基底膜厚度與DM組比較顯著減小(P<0.01)；DM組腎組織內(nèi)ED-1、NF-K B和MCP-1的

6、蛋白質(zhì)表達(dá)及MCP-1的mRNA表達(dá)均較NC組顯著上調(diào)(P<0.01)，而DM+LEF組上述指標(biāo)與DM組比較被顯著抑制(P<0.01或P<0.05)。腎臟的巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)與腎損害程度(用UAER表示)成正相關(guān)(r=0.889，P<0.01)。 [結(jié)論] 結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了STZ誘導(dǎo)建立的DM大鼠存在早期腎臟炎癥損害，經(jīng)LEF治療后可降低DM大鼠的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、改善腎臟高濾過(guò)狀態(tài)、減少尿蛋白排泄。應(yīng)用LEF治療后，可下調(diào)腎組