骨保護素對糖尿病腎病大鼠腎臟的保護作用及機制研究.pdf

1、背景：
　　 糖尿病腎病(Diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(Dialbetes Mellitus，DM)常見的嚴重微血管并發(fā)癥，是DM的主要死亡原因之一，大約20％-30％的2型糖尿病患者會出現(xiàn)糖尿病腎病，1型糖尿病出現(xiàn)糖尿病腎病的機率會更高，目前DN已成為終末期腎病(End stage renal disease，ESRD)的主要原因。DN發(fā)病機制復雜，尚未完全清楚，目前認為是多因素如糖代謝紊亂及其所導

2、致的血流動力學改變、細胞因子、炎癥因子等綜合作用的結果。DM病人一旦進入臨床DN期即蛋白尿期，隨著病程的進展就會出現(xiàn)持續(xù)蛋白尿、水腫、高血壓、腎小球濾過率下降、腎功能下降等臨床表現(xiàn)，病程不可逆轉，最終發(fā)展成終末期腎病，治療極為困難，并有極高的致殘率和致死率，所以早期對糖尿病腎病進行干預極為重要。
　　 腎小球內(nèi)皮細胞(Glomemlar Endothelial Cells，GECs)在腎小球濾過過程中起著重要的生理作用，在腎小球

3、疾病的形成過程中扮演著重要的角色，腎小球血管內(nèi)皮細胞是高血糖首當其沖的靶細胞，蛋白尿出現(xiàn)便是糖尿病腎臟微血管功能和結構的異常表現(xiàn)，腎小球內(nèi)皮細胞又稱腎臟微血管內(nèi)皮細胞，是腎小球濾過屏障的重要組成部分之一，承受著遠高于一般毛細血管的血壓。血流動力學的變化極易損傷腎小球內(nèi)皮細胞，另外血液中的致病因子如高血糖及局部的腎素.血管緊張素因子也非常容易損害血管內(nèi)皮層，DN的發(fā)生、發(fā)展與血管內(nèi)皮結構和功能障礙密切相關，腎小球內(nèi)皮細胞損傷后可激活多種炎

4、癥因子如單核細胞趨化因子(Monocytechemoattractant protein-1MCP-1)，引起炎癥細胞滲入腎小球，導致腎小球內(nèi)皮細胞密度降低，從而導致腎小球硬化和腎間質纖維化。因此如何減少腎小球內(nèi)皮細胞的損傷成為目前研究的熱點之一。
　　 新近研究表明骨保護素(osteoprotegerin，OPG)具有抗內(nèi)皮細胞凋亡，促進血管內(nèi)皮細胞成熟等作用，從理論上可能對糖尿病腎臟病變有一定的改善作用，但動物學實驗卻很少有

5、人研究，本研究通過建立DN大鼠模型，觀察OPG對糖尿病腎病大鼠模型24小時尿蛋白定量、血肌酐等生化指標及腎臟病理形態(tài)的改變并探討這一機制，為進一步了解DN的發(fā)病機制及對糖尿病腎病進行早期干預提供理論依據(jù)
　　 目的：
　　 (1)通過長期高脂飲食誘導及鏈尿佐菌素法構建糖尿病腎病大鼠模型，觀察OPG對糖尿病腎病大鼠基本狀況的改善和腎臟病變的延緩作用。
　　 (2)觀察OPG對糖尿病腎病大鼠CD34(代表腎小球內(nèi)皮細

6、胞密度)和MCP-1表達的影響來探討其改善和延緩糖尿病腎臟病變的的機制。
　　 方法：
　　 選擇Wistar大鼠，給予8周高脂飲食后再給予小劑量鏈尿佐菌素一次性腹腔注射建立DN大鼠模型，將DN大鼠模型隨機分為2組：DN模型組(n=15)、OPG干預組(n=15)，另設正常對照組(n=15)。OPG干預組每日給予8ug/kg體重的OPG加生理鹽水1ml腹腔注射一次；正常對照組和DN模型組每日以等量生理鹽水腹腔注射。各組大

7、鼠分籠喂養(yǎng)，全部大鼠自由進食，隨意飲水，自然照明。10周后，觀察各組大鼠基本狀況及體重；檢測24小時尿蛋白定量；處死大鼠，心臟穿刺取血，離心分離血清，測定血糖、血肌酐和尿素氮等指標；取雙腎，稱雙腎重量計算腎臟肥大指數(shù)(腎重/體重)；顯微鏡下觀察各組大鼠腎臟病理形態(tài)學改變(Masson染色，PASM染色)；檢測各組大鼠腎組織腎小球內(nèi)皮細胞密度(CD34表達情況)和MCP-1的表達情況(免疫組織化學法)。
　　 結果：
　　

8、 (1)DN模型組體重為(323.54±25.16g)、腎臟肥大指數(shù)為(0.64±0.01)、血糖為(19.75±1.87mmol/L)、24小時尿蛋白為(60.24±4.99mg/L)、肌酐為(37.46±11.99umol/L)、尿素氮為(19.82±4.26mmol/L)，而OPG干預組體重、腎臟肥大指數(shù)、血糖、24小時尿蛋白、肌酐、尿素氮分別為(411.33±28.79g)、(0.48±0.05)、(20.81±2.04mmol

9、/L)、(38.37±5.24mg/L)、(28.20±5.12umol/L)、(13.90±3.44mmol/L)，與DN模型組相比，OPG干預組大鼠血肌酐和尿素氮、腎臟肥大指數(shù)明顯減低、24小時尿蛋白定量減少(P<0.01)，而血糖無明顯改變；
　　 (2)DN模型組腎小球硬化指數(shù)為(3.93±0.64)、腎小管間質病變積分為(0.41±0.09)、而OPG干預組腎小球硬化指數(shù)、腎小管間質病變積分分別為(2.15±0.52)

10、、(0.34±0.07)，與DN模型組相比，OPG干預組光鏡下腎臟組織病理形態(tài)如腎小球硬化指數(shù)和腎小管間質病變積分變化明顯好轉(P<0.01和P<0.05)；
　　 (3)DN模型組腎組織腎小球內(nèi)皮細胞密度(CD34+免疫組化染色)為(2.45±0.43)，而OPG干預組腎小球內(nèi)皮細胞密度(CD34+免疫組化染色)為(5.13±0.58)，與DN模型組相比，腎組織腎小球內(nèi)皮細胞密度增加(P<0.01)；
　　 (4)DN

11、模型組腎組織MCP-1的表達為(4.73±0.86)，而OPG干預組腎組織MCP.1的表達為(3.78±0.44)，與DN模型組相比，腎組織MCP.1的表達減少(P<0.01)；
　　 (5)腎組織腎小球內(nèi)皮細胞密度(CD34免疫組化染色)與24小時尿蛋白定量、腎小球硬化指數(shù)和腎小管間質病變積分成負相關(P<0.01)；
　　 (6)腎組織腎小球內(nèi)皮細胞密度和腎組織MCP-1的表達成負相關(P<0.01)。