脂氧素A4抑制破骨細(xì)胞生成及防止卵巢切除后骨質(zhì)流失.pdf

1、目的：
　　1.研究LXA4對(duì)RAW264.7細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化和成熟破骨細(xì)胞功能的影響；
　　2.研究LXA4在RAW264.7細(xì)胞中影響破骨細(xì)胞分化和功能的具體分子機(jī)制；
　　3.觀察在小鼠卵巢切除動(dòng)物模型中，經(jīng)LXA4干預(yù)后，小鼠骨微結(jié)構(gòu)及其他血清指標(biāo)的變化情況。
　　方法：
　　1.采用CCK-8法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)所需濃度的LXA4和Boc-2對(duì)于RAW264.7細(xì)胞增殖的影響；測(cè)定LXA4受體FPR2/A

2、LX在RAW264.7細(xì)胞及成熟破骨細(xì)胞中的表達(dá)，并觀察受體拮抗劑對(duì)其表達(dá)的影響；在RANKL誘導(dǎo)的條件下使RAW264.7細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化，并利用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色檢測(cè)LXA4及其受體拮抗劑對(duì)破骨細(xì)胞發(fā)生和TRAP酶活性的影響；通過骨板吸收實(shí)驗(yàn)觀察LXA4對(duì)于成熟破骨細(xì)胞骨吸收功能的影響。
　　2.通過實(shí)時(shí)定量 RT-PCR和 Western Bloting檢測(cè) LXA4在 RANKL誘導(dǎo)條件下RAW264.7

3、細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的進(jìn)程中對(duì)相關(guān)標(biāo)志性基因表達(dá)和相關(guān)信號(hào)通路的影響；采用化學(xué)發(fā)光法凝膠電泳遷移率實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LXA4對(duì)NF-κB和AP-1的調(diào)節(jié)作用。
　　3.利用卵巢切除手術(shù)建立12周齡雌性C57/BL6小鼠骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型，給予實(shí)驗(yàn)組LXA4（10μg/kg/d）腹腔注射治療，于6周后取股骨進(jìn)行μ-CT骨微結(jié)構(gòu)掃面和骨切片TRAP染色，并檢測(cè)血清中相關(guān)炎性因子水平。
　　結(jié)果：
　　1. LXA4能夠顯著抑制RAW26

4、4.7細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化和成熟破骨細(xì)胞的功能，這一效應(yīng)能夠被LXA4受體FPR2/ALX的特異性拮抗劑Boc-2所阻斷；
　　2. LXA4能夠抑制破骨細(xì)胞特異性基因的表達(dá)，包括TRAP、MMP-9、組織蛋白酶K、RANK；破骨細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子c-Fos、NFATc1的表達(dá)也可被LXA4抑制；同時(shí)，LXA4降低了PI3-AKT以及MAPKs通路中p-38、ERK、JNK的活化，抑制了RANKL誘導(dǎo)的NF-κB和激活蛋白-1的激活和

5、活性氧的產(chǎn)生。
　　3. LXA4能夠顯著抑制小鼠骨質(zhì)疏松模型中卵巢切除所致的骨流失，并降低血清中RANK與骨保護(hù)素比值以及相關(guān)炎癥因子水平。
　　結(jié)論：
　　LXA4可以通過對(duì)RANK-RANKL通路的抑制以及下調(diào)其下游相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和相關(guān)基因，蛋白的表達(dá)來(lái)發(fā)揮抑制破骨細(xì)胞分化和活性的效果，并且在卵巢切除后骨質(zhì)疏松小鼠動(dòng)物模型中對(duì)改善骨微結(jié)構(gòu)具有明顯效應(yīng)，因此LXA4可能成為治療骨質(zhì)疏松和破骨細(xì)胞相關(guān)疾病的新契機(jī)。