脂氧素A4對高氧暴露下肺泡二型上皮細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制.pdf

1、目的：研究脂氧素A4對高氧暴露下肺泡二型上皮細(xì)胞的保護(hù)作用，探討LXA4在高氧肺損傷中的作用及機(jī)制。
　　方法：AECII細(xì)胞原代培養(yǎng)，并隨機(jī)分為Ⅰ：.空氣組（對照組）、Ⅱ：.高氧組、Ⅲ：.空氣+LXA4組、Ⅳ：.高氧+LXA4組。Ⅰ和Ⅲ組暴露于空氣中，Ⅱ和Ⅳ組暴露于95％的氧氣中，Ⅰ和Ⅱ組不加藥，Ⅲ和Ⅳ組給予LXA4干預(yù)。于暴露12h后在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)及形態(tài)學(xué)變化；2'，7'-二氯二氫熒光素二乙酯（DCFH-D

2、A）染色后熒光顯微鏡檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平；并通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR測定細(xì)胞內(nèi)Nrf2、HO-1和NQO1mRNA的表達(dá)量；免疫熒光染色檢測Nrf2的核轉(zhuǎn)移情況。
　　結(jié)果：（1）空氣組和空氣+LXA4組細(xì)胞呈立方形或圓形島狀生長，貼壁好，細(xì)胞與細(xì)胞之間緊密連接，胞質(zhì)內(nèi)可見較多顆粒（板層小體），幾乎無懸浮細(xì)胞.；高氧組暴露12h后，與空氣組、空氣+LXA4組比較細(xì)胞體積減小，細(xì)胞間隙明顯增大，胞內(nèi)顆粒數(shù)目減少，貼壁欠佳，可見大量懸浮

3、死細(xì)胞；高氧+LXA4組與高氧組比較，細(xì)胞排列較緊密，貼壁較好，懸浮細(xì)胞較少，與空氣組、空氣+LXA4組比較，細(xì)胞外形變化不大，細(xì)胞間隙稍增寬，可見少量懸浮細(xì)胞。
　?。?）免疫熒光結(jié)果顯示，空氣組和空氣+LXA4組ROS熒光強(qiáng)度很弱，幾乎不可見；高氧組暴露12h后，與空氣組、空氣+LXA4組比較，細(xì)胞內(nèi)ROS熒光強(qiáng)度明顯增加；高氧+LXA4組暴露12h后，與高氧組比較，ROS熒光強(qiáng)度明顯降低，但與空氣組、空氣+LXA4組比較，R

4、OS熒光強(qiáng)度仍有一定程度的增加。
　?。?）免疫熒光結(jié)果顯示，空氣組和空氣+LXA4組Nrf2主要集中在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，無明顯核轉(zhuǎn)移；高氧組暴露12h后，與空氣組、空氣+LXA4組比較，Nrf2出現(xiàn)核轉(zhuǎn)移，在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核內(nèi)均可見表達(dá)；高氧+LXA4組暴露12h后，與高氧組比較，Nrf2核轉(zhuǎn)移更明顯，與空氣組、空氣+LXA4組比較，Nrf2出現(xiàn)明顯核轉(zhuǎn)移，細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核內(nèi)均可見高表達(dá)。
　　（4）高氧暴露12h后各組AECII細(xì)胞

5、Nrf2mRNA相對于空氣組的表達(dá)量分別為：空氣+LXA4組：1.011±0.052；高氧組：1.614±0.130；高氧+LXA4組：2.013±0.258?？諝?LXA4組表達(dá)量與空氣組無明顯區(qū)別，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；高氧組表達(dá)量較空氣組、空氣+LXA4組增加，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；高氧+LXA4組表達(dá)量較高氧組、空氣組和空氣+LXA4組均明顯增加，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　（5

6、）高氧暴露12h后各組AECII細(xì)胞HO-1mRNA相對于空氣組的表達(dá)量分別為：空氣+LXA4組：1.067±0.081；高氧組：1.509±0.118；高氧+LXA4組：1.951±0.241?？諝?LXA4組表達(dá)量與空氣組無明顯區(qū)別，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；高氧組表達(dá)量較空氣組、空氣+LXA4組增加，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；高氧+LXA4組表達(dá)量較高氧組、空氣組和空氣+LXA4組均明顯增加，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義（P<0.01）。
　?。?）高氧暴露12h后各組AECII細(xì)胞NQO1mRNA相對于空氣組的表達(dá)量分別為：空氣+LXA4組：1.027±0.101；高氧組：1.519±0.153；高氧+LXA4組：1.944±0.244。空氣+LXA4組表達(dá)量與空氣組無明顯區(qū)別，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；高氧組表達(dá)量較空氣組、空氣+LXA4組增加，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；高氧+LXA4組表達(dá)量較高氧組、空氣組和空氣+LX