環(huán)氧類二十烷酸對破骨細胞生成的抑制及防止卵巢切除所致的骨流失.pdf

1、目的：
　　1.探討外源性EETs在體外對破骨細胞生成及功能的影響和機制。
　　2.觀察對骨質疏松模型小鼠進行腹腔注射外源性EETs后小鼠體內骨組織及其他的相關變化。
　　方法：
　　1.體外實驗：分別用破骨細胞系RAW264.7和小鼠原代骨髓單核細胞加入RANKL被用來誘導破骨細胞生成，此外，小鼠原代骨髓單核細胞還加入mCSF。對以上兩種細胞加入14,15-EET（濃度為0.25μM，0.5μM，1μM，2μM

2、）。通過抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）染色、測細胞培養(yǎng)上清內的TRAP活性、骨吸收實驗、檢測破骨細胞相關基因和蛋白的變化等方法測定EET對破骨細胞的形成及功能的影響。
　　2.體內實驗：取4月大小C57/BL6雌鼠，進行假手術及去卵巢（ovariectomy，OVX)手術，將14,15-EET(0.17 mg/kg)對OVX組小鼠體內進行腹腔注射，于術后六周對

3、實驗組及對照組小鼠進行外周血TRAP酶聯(lián)免疫測試，檢測相關炎性因子的血清水平，骨切片TRAP染色及用μCT掃描評估骨組織形態(tài)學。
　　結果：
　　通過體外和體內實驗，我們觀察到 EETs顯著抑制骨流失及破骨細胞的形成和活性，這一作用與減少NF-κB活化受體配體(RANKL)的活化、骨保護素的比率及血清中TNF-α和IL-1β的水平有關。在破骨細胞形成分子水平，EETs抑制RANKL導致的NF-κB的激活、及激活蛋白-1(AP

4、-1)和絲裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信號通路中細胞外調節(jié)蛋白激酶（Extracellular Regulated Protein Kinase，ERK）和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal Kinase，JNK）的活化。此外，EETs還抑制了RANKL刺激后的活性氧（ROS）的產(chǎn)生。因而，EETs抑制了破骨細胞相關的基因表達：抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、組織蛋白酶 K（CK）、基質金屬蛋白酶(MMP)-9和