補陽還五湯對rBMECs氧糖剝奪再灌注損傷的保護作用.pdf

1、廣糊中醫(yī)藥大學學位論文原刨性聲明本人鄭重聲踢：所星交的學位論文，是個人在器師的指導下，獨立進行研究工終所取得的成果。滁文中已經(jīng)特別艦以注明弓|孀的內容外，本論文不含任簿其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作晶成果。對涔文的研究微也羹要貢獻髓個人和集體，均已在文中以明確方式標明并致謝。零入競壘意識魏本聲明豹法德熊累由本人承掇。學德論文作者簽名蛐網(wǎng)勰：—陽≯善籀落露V≥嗣關于學位論文使用授權的聲明本入完全了解廣州中朦莼大攀有關保翅使用孥挺論文麴

2、規(guī)定，圍意學校僳餮或囪蓬家有關部門祝掏送交論文的復幫傳和電予舨，允許被查褥鞫借潮。零入授權廣刪中醫(yī)莼太學霹戳將本學位論文豹全部或部分侮客編入有關數(shù)據(jù)霹迸行檢索，可以采藤影印、縮印或其他復印乎段保存和匯編零學位論文。(保密論文在解密盾泣遵守此規(guī)定)論文佟名j豎妙在倒置顯微鏡下觀察氧糖剝奪再灌注處理后rBMECs的形態(tài)學變化。并采用CCK8法檢測各組細胞的吸光度值、臺盼藍計數(shù)法計數(shù)各組細胞的死亡率。3補陽還五湯安全濃度的確定將rBMECs分

3、為對照組、模型組、補陽還五湯給藥組，其中補陽還五湯給藥組設置4個劑量，分別是1嵋mL～，10ggmLl，100btgmL～，1000燼mL～，CCK8法檢測補陽還五湯對rBMECs的有效濃度和安全濃度。4血腦屏障通透性檢測按照安全濃度的篩選，將rBMECs分為正常對照組、氧糖剝奪再灌注處理組、補陽還五湯低劑量(10ggmL‘1)和高劑量(100ggmL“1)處理組。各組作相應處理后收集Transwell小室兩側的液體，熒光分光光度計測定

4、吸光度，計算各組的BSA透過率，以此確定氧糖剝奪再灌注處理對血腦屏障模型的損傷程度以及補陽還五湯是否對其具有保護作用。5Westernblot檢測Occludin及ZO1蛋白水平將rBMECs分為正常對照組、氧糖剝奪再灌注處理組、補陽還五湯低劑量組、補陽還五湯高劑量組，提取各組rBⅧCs的總蛋白，采用蛋白免疫印跡法來檢測蛋白中Occludin、ZO1的量，探討氧糖剝奪再灌注處理以及補陽還五湯對體外血腦屏障模型緊密連接蛋白表達的影響。6熒

5、光定量RTPCR檢測Occludin及ZO1蛋白mRNA的表達水平將rBMECs分為正常對照組、氧糖剝奪再灌注處理組、補陽還五湯低劑量組、補陽還五湯高劑量組，分別提取各組rBMECs的總RNA，采用熒光定量RTPCR法檢測其緊密連接蛋白Occludin、ZO1mRNA的表達水平。7CCK8法測定細胞增殖將rBMECs分為正常對照組、氧糖剝奪再灌注組、補陽還五湯低劑量組、補陽還五湯高劑量組，用CCK8法檢測各組細胞的吸光度值，研究補陽還五

6、湯對氧糖剝奪再灌注細胞的促增殖作用。8BrdU檢測細胞增殖接種細胞爬片，將爬片分為正常組、模型組、補陽還五湯高、低劑量組，并對相應組別進行氧糖剝奪處理。采用BrdU摻入試驗，在復氧糖時更換含有BrdU及補陽還五湯藥物的培養(yǎng)基，放入細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h后將細胞爬片進行BrdU免疫熒光染色，觀測rBMECs的增殖狀況，并計算BrdU標記指數(shù)。9流式細胞儀檢測細胞周期將rBMECs接種于培養(yǎng)皿中，分為正常組、氧糖剝奪再灌注處理組、補陽還