玉米苗期根系淹水應(yīng)答相關(guān)基因的篩選、克隆以及鑒定.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文玉米苗期根系淹水應(yīng)答相關(guān)基因的篩選、克隆以及鑒定姓名：鄒錫玲申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：鄭用璉201106華中農(nóng)業(yè)大學(xué)201l屆博：卜研究生學(xué)位論文出不同的應(yīng)答反應(yīng)。而選擇性剪接產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄本在淹水脅迫下也表現(xiàn)出不同的豐度變化，這表現(xiàn)在同一個(gè)基因的不同剪接轉(zhuǎn)錄中，而不同基因的選擇性剪接轉(zhuǎn)錄本也如是。這表明在HZ32中，zmP4ll在淹水應(yīng)答過程中受到選擇性剪接這種轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制的調(diào)控。3以

2、本課題組前期篩選到的耐漬相關(guān)EST為基礎(chǔ)，利用RACE技術(shù)，從玉米耐漬自交系HZ32克隆得到zmbRLZ基因全長，序列分析顯示，zmbRLZ蛋白質(zhì)由282個(gè)氨基酸組成，從第118位到第182位肽段與BRLZ5和bZIP高度同源，且含亮氨酸重復(fù)序列。realtimePCR結(jié)果顯示zmbRLZ基因的表達(dá)量在耐漬材料HZ32中淹水后4h達(dá)到最大，而在敏感材料M017中其表達(dá)量則基本維持不變。構(gòu)建zmbRLZ與GFP融合載體，洋蔥表皮的瞬時(shí)表達(dá)

3、結(jié)果表明，zmbRLZ編碼的蛋白定位于細(xì)胞核，說明zmbRLZ蛋白是能在細(xì)胞核中發(fā)揮功能的轉(zhuǎn)錄因子。對zmbRLZ利用大腸桿菌系統(tǒng)進(jìn)行體外蛋白質(zhì)表達(dá)，并利用GST標(biāo)簽純化該蛋白質(zhì)，凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)表明，該融合蛋白能夠與Adhl基因啟動子中的厭氧應(yīng)答元件序列發(fā)生特異地結(jié)合，推測其能夠調(diào)控下游啟動子區(qū)域里含有ARE順式元件的應(yīng)答基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。根據(jù)自交系HZ32和K12在zmbRLZ基因序列中的SNP設(shè)計(jì)引物，成功開發(fā)了基于SNP的CAPS標(biāo)記