水稻白葉枯病菌無毒新基因的功能鑒定以及Quorum Sensing相關基因的克隆和表達.pdf

1、1.用IS-PCR和rep-PCR法分析了17份分離自云南滇西高原粳稻區(qū)的水稻白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)和7個其它地區(qū)的水稻白葉枯病菌的群體遺傳多樣性.2個適合中國水稻白葉枯病菌的引物J3和ERIC對這24個菌系基因組DNA進行PCR擴增反應,J3引物有14條條帶,ERIC引物有13條條帶,2個引物呈現(xiàn)18種譜型.2.菲律賓白葉枯病菌株PXO339是9a生理小種的代表菌株,它對Xa7,Xa4,

2、Xa10和Xa14等抗病基因表現(xiàn)毒性,而對隱性抗病基因xa5表現(xiàn)無毒.從PXO339中克隆到一個新的無毒基因,全長2118bp,編碼705個氨基酸,分子量和等電點分別為74.7kDa和6.585.NCBI網(wǎng)站BLAST表明,該基因?qū)儆贏vrBs3基因家族,命名為arp3(AvrBs3 related protein).與所有AvrBs3基因家族成員的基因序列Alignment分析發(fā)現(xiàn),Arp3的N-端缺少了兩個長度分別是144bp和45

3、bp的片斷.進一步研究發(fā)現(xiàn),在水稻白葉枯病菌中,Arp3N-端的特征很普遍,都缺少這兩個片斷.全長的arp3基因中間序列是一個特異的5.5次102bp的重復區(qū)(Repeats),是目前已經(jīng)克隆的AvrBs3基因家族所有成員中重復次數(shù)最少的一個.Southern分析發(fā)現(xiàn)該基因在PXO339基因組中單拷貝存在,而且只位于PXO339的質(zhì)粒DNA上,推測它可能是一個候選的avrxa5基因.3.從白葉枯病菌中克隆到兩個Quorum Sensin

4、g(QS)相關的同源基因.xooR是一個轉(zhuǎn)錄因子,全長765bp;相鄰的amino acid transporter(aat)基因是一個跨膜蛋白,全長1377bp.Southern分析表明,這兩個基因單拷貝存在基因組中.利用原核表達載體pET-24a-d(+)構(gòu)建融合表達載體,EGFP基因標記,跨膜蛋白aat基因在膜上表達;Western分析顯示XooR-GFP融合蛋白大小為54kDa,表達在細胞液中某一特定區(qū)域,PCR方法刪除XooR