普那霉素高產相關基因的篩選與克隆.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、浙江大學化學工程與生物工程學系碩士學位論文普那霉素高產相關基因的篩選與克隆姓名：洪小偉申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化工指導教師：金志華20100101浙江大學碩士學位論文AbstractAbstractPristinamycin，amemberofthestreptograminfamilyofantibiotics，isproducedbyStreptomycespristinaespiralisForthepresent，littl

2、eresearchongeneticengineeringofpristinamycinproducingstrainhasbeenconductedoverseasandthereisnoresearchasyetathome，whichblocksthedevelopmentofimprovementofpristinamycinproductionthroughgeneticengineeringInthisarticle，wed

3、idsomeexploratoryresearchongeneticengineeringofpristinamycinproducingstrainFirstly，amplifiedfragmentlengthpolymorpHism(AFLP)techniquewithtwosetsofsinglerestrictionenzymeApaIandSaclIdigestsWasperformedinthisexperiment，and

4、fourpolymorpHicDNAfragmentsonlycouldbedistinguishedfromthegenomesofthehigh—yieldrecombinants，whichWasabsentintheinitialstainATCC25486Aftercloning，sequencingandsimilarityanalysisoftheseDNAfragments，twohomologuesofhighyiel

5、d—relatedgeneswerefoundfortheamplificationtreatmentofApaIselectiveprimersOnewasthehomologueof咖RregulatorygeneandanotherWastransposasegeneTwohomologuesofhighyieldrelatedgeneswerealsoamplifiedwithSaclIselectiveprimersOneWa

6、sthehomologueofa必KregulatorygeneandanotherwasexodeoxyribonucleaseencodedgeneexoSCSecondlyselectingthecosmidsupercos一1asthevectoragenomiccosmidlibraryofpristinamycin—producingstrainofF618WaSsuccessfullyconstructedInthispa

7、rtofexperiment，themethodofextractinggenomicDNAwasimprovedtoobtainthehighmoleculargenomicDNAAlsotheconditionofpartiallydigestingofgenomicDNAwasoptimizedtoobtain35—45kbdigestedfragmentsThroughconnectingpartialfragmentswith

8、vectorpackagingtherecombinantcosmidtobebacteriopHages，andtransductingthebacteriopHagesintoEcoli，ahi曲qualitycosmidgenomiclibraryWassuccessfullyconstructedFinallywiththeDIGlabelledgenefragmentofafskasaprobe，anovelgenewassc

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