基于Wnt-β-catenin信號(hào)通路探討黃芩苷在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)機(jī)制.pdf

1、目的:
　　本課題旨在通過觀察黃芩苷對(duì)H2O2誘導(dǎo)的氧化受損心肌細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號(hào)通路的調(diào)控作用及其心肌細(xì)胞保護(hù)作用，探討黃芩苷改善心肌細(xì)胞氧化損傷的分子機(jī)制。
　　方法:
　　先通過TOPFLASH/Renilla雙熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)，檢測(cè)黃芩苷對(duì)β-catenin/TCF轉(zhuǎn)錄活性的影響，明確黃芩苷對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的調(diào)控作用。然后，用H2O2刺激H9c2大鼠心臟細(xì)胞，誘導(dǎo)心肌氧

2、化損傷細(xì)胞模型，分別采用MTT法、Western Blot法檢測(cè)不同濃度的黃芩苷對(duì)H2O2刺激H9c2細(xì)胞誘導(dǎo)的心肌氧化損傷細(xì)胞模型的細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡相關(guān)指標(biāo)和Wnt/β-catenin信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄活性相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，初步評(píng)價(jià)黃芩苷對(duì)心肌氧化損傷細(xì)胞模型中Wnt/β-catenin信號(hào)通路的調(diào)控作用及其心肌細(xì)胞保護(hù)作用。進(jìn)而，通過siRNA沉默H9c2細(xì)胞中β-catenin的表達(dá)，觀察β-catenin表達(dá)下調(diào)對(duì)H9c2細(xì)胞氧化

3、損傷的影響，并探討β-catenin在H9c2細(xì)胞氧化損傷中的作用。最后，用LiCL（β-catenin的穩(wěn)定劑）干預(yù)H9c2細(xì)胞，觀察黃芩苷對(duì)LiCL干預(yù)下的H9c2細(xì)胞中β-catenin和凋亡相關(guān)指標(biāo)蛋白表達(dá)水平的影響，驗(yàn)證上述實(shí)驗(yàn)觀察到的結(jié)果。此外，我們用H2O2刺激SD乳鼠原代心肌細(xì)胞，誘導(dǎo)心肌氧化損傷細(xì)胞模型，進(jìn)一步驗(yàn)證在H9c2細(xì)胞建立的心肌氧化損傷細(xì)胞模型中得出的結(jié)論。
　　結(jié)果:
　　TOPFLASH/Re

4、nilla雙熒光素酶報(bào)告基因結(jié)果表明，黃芩苷能夠顯著下調(diào)Wnt30及Wnt/β-catenin信號(hào)通路激活劑(LiCL、BIO、β-cateninΔN)激活的β-catenin/TCF轉(zhuǎn)錄活性，且呈劑量依賴性。在H2O2刺激H9c2大鼠心臟細(xì)胞誘導(dǎo)的心肌氧化損傷細(xì)胞模型中發(fā)現(xiàn)，黃芩苷能夠明顯阻止氧化受損的H9c2細(xì)胞活力的下調(diào);且明顯下調(diào)氧化受損的H9c2細(xì)胞中凋亡指標(biāo)Cleaved caspase-3、Bax的表達(dá)，上調(diào)抗凋亡指標(biāo)Bc

5、l-2的表達(dá)和Bcl-2/Bax比值，同時(shí)，抑制β-catenin及其下游蛋白Axin、c-Myc的蛋白表達(dá)水平。此外，沉默β-catenin也能夠明顯下調(diào)H2O2誘導(dǎo)下的H9c2細(xì)胞中Cleaved caspase-3和Bax的表達(dá)，并上調(diào)Bcl-2/Bax比值;黃芩苷能夠阻止LiCL（β-catenin的穩(wěn)定劑）誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞中β-catenin的高表達(dá)和細(xì)胞凋亡。在H2O2刺激SD乳鼠原代心肌細(xì)胞誘導(dǎo)的心肌氧化損傷細(xì)胞模型中，

6、同樣能夠觀察到黃芩苷對(duì)氧化受損的心肌細(xì)胞的保護(hù)作用，且能夠明顯下調(diào)氧化受損的原代心肌細(xì)胞核內(nèi)β-catenin的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　本課題研究首次探討了黃芩苷對(duì)氧化受損心肌細(xì)胞的保護(hù)作用與Wnt/β-catenin信號(hào)通路的關(guān)系。結(jié)果表明，β-catenin在心肌細(xì)胞氧化損傷中起著至關(guān)重要的作用，氧化受損心肌細(xì)胞中β-catenin高表達(dá)，且減弱β-catenin的表達(dá)能夠改善氧化受損心肌細(xì)胞的損傷。黃芩苷極有可能通過抑