阿托伐他汀對子宮肌瘤細胞的作用及其相關機制研究.pdf

1、目的：
　　阿托伐他汀為他汀類藥物中最常見的一種。研究發(fā)現(xiàn)，阿托伐他汀能有效抑制部分惡性腫瘤細胞的增殖。但是，阿托伐他汀對子宮肌瘤是否有抑制作用目前尚不清楚。本實驗采用體外原代人子宮平滑肌瘤細胞以及永生化人子宮平滑肌瘤細胞培養(yǎng)，研究阿托伐他汀對子宮平滑肌瘤細胞增殖和細胞凋亡的影響及其相關機制，為有效治療子宮肌瘤提供新思路。
　　方法：
　　（1）采用細胞培養(yǎng)永生化子宮平滑肌瘤細胞以及通過膠原酶消化法進行原代培養(yǎng)子宮平滑

2、肌瘤細胞，用免疫細胞化學染色SP法分別對子宮平滑肌瘤細胞進行鑒定。（2）通過CCK8法檢測兩種細胞增殖活性及抑制率：不同濃度（0μM、1μM、5μM、10μM、20μM、40μM）阿托伐他汀作用原代及永生化子宮平滑肌瘤細胞不同時間（24h，48h，72h）。（3）通過流式細胞術檢測兩種細胞凋亡率：不同濃度（0μM、1μM、5μM、10μM、20μM、40μM）阿托伐他汀分別作用永生化子宮平滑肌瘤細胞48h和72h；運用Annexin V

3、-FITC/PI雙標記流式細胞儀檢測細胞凋亡從而選取藥物最佳作用時間。（4）通過phospho-MAPK抗體芯片檢測經(jīng)阿托伐他汀作用后永生化子宮平滑肌瘤細胞內MAPK相關信號通路的蛋白變化情況。（5）分別選取細胞增殖抑制和凋亡促進最佳時間提取蛋白，通過蛋白質印跡法（Western blot）分析阿托伐他汀對子宮平滑肌瘤細胞增殖（PCNA）和凋亡（Caspase3、Bcl-2、Bax）相關蛋白和ERK1/2蛋白的影響及其機制。
　　

4、結果：
　?。?）在不同濃度（0μM、1μM、5μM、10μM、20μM、40μM）阿托伐他汀作用后兩種子宮平滑肌瘤細胞增殖均出現(xiàn)明顯抑制（差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.05），且隨著阿托伐他汀濃度增加，兩種細胞增殖抑制率隨之相應增高，P＜0.05；隨阿托伐他汀作用時間（24h，48h，72h）增加兩種細胞增殖抑制率也增加，P＜0.05。永生化子宮平滑肌瘤細胞在不同濃度阿托伐他汀作用48h細胞增殖抑制率達到高峰，原代子宮平滑肌瘤細胞則

5、在阿托伐他汀作用72h細胞增殖抑制達到高峰。（2）隨著阿托伐他汀濃度以及作用時間的增加，細胞凋亡率逐漸升高，P＜0.05。永生化子宮平滑肌瘤細胞在阿托伐他汀作用48h凋亡達到高峰，原代子宮肌瘤細胞在阿托伐他汀作用72h凋亡率變化不明顯。（3）在經(jīng)過phospho-MAPK抗體芯片檢測細胞后，觀察到其中p-ERK2、p-JNK pan、p-HSP27蛋白位點有下調趨勢，p-ERK2、p-JNK pan下調顯著，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.0